Hayvon to'qimalarining to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG (namuna olish vositalarisiz) protokoli
To'plam tavsifi:
To'g'ridan-to'g'ri hayvon to'qimalarining lizatini PCR amplifikatsiyasi uchun shablon sifatida foydalaning, DNKni alohida ekstraktsiyasiz, tez va yuqori sezuvchanlik.Noto'g'ri pozitivlarni yo'q qilish uchun UNG ifloslanishga qarshi tizimi qo'shildi.
◮Ko'p vaqt talab qiladigan va qimmat DNKni tozalash talab qilinmaydi.
◮Namuna talabi kichik, faqat bitta urug'ni oling.
◮Maydalash va maydalash kabi maxsus muolajalar talab qilinmaydi va operatsiya oddiy.
◮Optimallashtirilgan PCR tizimi PCRga yuqori o'ziga xoslik va PCR reaktsiyasi ingibitorlariga nisbatan kuchli bardoshlik imkonini beradi.
Tavsiflar
Ushbu to'plam hayvonlarning to'qimalari namunalaridan genomik DNKni PCR reaktsiyalari uchun tezda chiqarish uchun noyob lizis bufer tizimidan foydalanadi, shuning uchun u keng ko'lamli genetik testlar uchun ayniqsa mos keladi.
Lizis buferidan genomik DNKni chiqarish jarayoni 65°C da 10-30 minut ichida yakunlanadi.Protein va RNKni olib tashlash kabi boshqa jarayonlar talab qilinmaydi va chiqarilgan iz DNK PCR reaktsiyasi uchun shablon sifatida ishlatilishi mumkin.
2 × PCR osonTMMix (UNG) 2×PCR Easy asosida dTTP o'rniga dUTP dan foydalanadiTMAralashtiring va bir vaqtning o'zida dUTP o'z ichiga olgan shablonni buzishi mumkin bo'lgan UNG fermentini (Uratsil-N-glikozilaz) qo'shing.PCR reaktsiyasidan oldin UNG fermenti urasil o'z ichiga olgan PCR mahsulotini buzish uchun ishlatiladi.UNG fermenti tarkibida urasil bo'lmagan shablonga hech qanday ta'sir ko'rsatmaydi, shu bilan kuchaytirishning o'ziga xosligi va aniqligini ta'minlaydi va keng miqyosli genetik testlar paytida PCR mahsulotlarining ifloslanishining oldini oladi.
D-Taq DNK polimeraza - bu bevosita PCR reaktsiyalari uchun Foregene tomonidan maxsus ishlab chiqilgan DNK polimeraza.D-Taq DNK polimeraza turli xil PCR reaktsiyasi ingibitorlariga kuchli tolerantlikka ega va turli xil murakkab reaktsiya tizimlarida DNKning iz miqdorini samarali ravishda kuchaytirishi mumkin va kuchaytirish tezligi 2Kb / min ga yetishi mumkin, bu ayniqsa To'g'ridan-to'g'ri PCR reaktsiyasi uchun mos keladi.
To'plam komponentlari
| I qism | Bufer AL |
| Forgen proteaz | |
| 6 × DNKni yuklash buferi | |
| II qism | 2 × PCR osonTMMix(UNG) |
Xususiyatlari va afzalliklari
■Ko'p vaqt talab qilmaydigan va qimmat DNKni tozalash
■ Namuna talabi kichik, 5 mg hayvon to'qimasini sinab ko'rish mumkin.
■ Maydalash va maydalash kabi maxsus ishlov berish talab qilinmaydi va operatsiya oddiy.
■ Optimallashtirilgan PCR tizimi PCRni yuqori o'ziga xoslik va PCR reaktsiyasi ingibitorlariga nisbatan kuchli bardoshlik qiladi.
■ Ifloslanishga qarshi PCR tizimi 2×PCR osonTMMix (UNG) PCR mahsulotlaridan kelib chiqadigan ifloslanishni samarali ravishda yo'q qiladi va kuchaytirishning o'ziga xosligi va aniqligini ta'minlaydi.
Kit parametrlari
Ilova: hayvonlarning turli to'qimalari.
Namuna lizisidan chiqarilgan DNK: faqat PCR shabloni sifatida ishlatiladi.
To'plamdan quyidagi maqsadlarda foydalanish mumkin: transgenozni aniqlash, hayvonlarning genotipini aniqlash va boshqalar.
Ish oqimi
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plamning I qismi 2-8 da saqlanishi kerak℃.
Buffer AL reaktivi quruq sharoitda 12 oy davomida saqlanishi mumkin;2-8 da saqlanishi mumkin℃uzoqroq saqlash uchun.
Reagent Foregene Protease noyob formulaga ega.Uning faolligi va barqarorligini ta'minlash uchun uni 4 da saqlang℃12 oy davomida.
Reaktiv 6×DNKni yuklash buferi 4 da saqlanishi mumkin℃yoki -20℃uzoq vaqt davomida; anchadan beri.
Ushbu to'plamning II qismi -20 da saqlanishi kerak℃.
Reaktiv 2×PCR osonTMMix(UNG), agar u tez-tez ishlatilsa, uni 4 da saqlash mumkin℃qisqa muddatli saqlash uchun (10 kun ichida foydalanish).
