Molekulyar biologiyaning asosiy atamalarini tushuntirish
1. cDNK va cccDNA: cDNK mRNKdan teskari transkriptaza bilan sintez qilingan ikki zanjirli DNK;cccDNA - bu xromosomadan xoli plazmidli ikki zanjirli yopiq dumaloq DNK.
2. Standart katlama birligi: oqsil ikkilamchi struktura birligi a-spiral va b-varaq turli bog'lovchi polipeptidlar orqali maxsus geometrik tartibga ega bo'lgan strukturaviy bloklarni hosil qilishi mumkin.Ushbu turdagi qat'iy katlama odatda super ikkilamchi struktura deb ataladi.Deyarli barcha uchinchi darajali tuzilmalarni bu katlama turlari va hatto ularning birlashtirilgan turlari bilan tavsiflash mumkin, shuning uchun ular standart katlama birliklari deb ham ataladi.
3. CAP: siklik adenozin monofosfat (cAMP) retseptorlari oqsili CRP (cAMP retseptorlari oqsili), cAMP va CRP birikmasidan keyin hosil bo'lgan kompleks faollashtiruvchi protein CAP (cAMP faollashtirilgan protein) deb ataladi.
4. Palindromik ketma-ketlik: DNK fragmenti segmentining teskari to'ldiruvchi ketma-ketligi, ko'pincha cheklov fermenti joyi.
5. micRNK: mRNK ketma-ketligini to'ldiruvchi va mRNKning tarjimasini inhibe qilishi mumkin bo'lgan qo'shimcha interferent RNK yoki antisens RNK.
6. Ribozim: katalitik faollikka ega bo'lgan RNK, RNKning birikish jarayonida avtokatalitik rol o'ynaydi.
7. Motif: Protein molekulalarining fazoviy tuzilishida oʻxshash uch oʻlchamli shakli va topologiyasiga ega boʻlgan baʼzi mahalliy hududlar mavjud.
8. Signal peptid: oqsil sintezi jarayonida N-uchida 15-36 aminokislota qoldig'i bo'lgan peptid, oqsilning transmembranasiga rahbarlik qiladi.
9. Attenuator: Operator hududi va transkripsiyani tugatuvchi strukturaviy gen orasidagi nukleotidlar ketma-ketligi.
10. Sehrli nuqta: Bakteriyalar o'sib, aminokislotalarning to'liq etishmasligiga duch kelganda, bakteriyalar barcha genlarning ifodalanishini to'xtatish uchun favqulodda javob ishlab chiqaradi.Ushbu favqulodda javobni yaratuvchi signallar guanozin tetrafosfat (ppGpp) va guanozin pentafosfat (pppGpp).PpGpp va pppGpp roli faqat bir yoki bir nechta operon emas, balki ularning ko'p sonini ta'sir qiladi, shuning uchun ular super-regulyatorlar yoki sehrli dog'lar deb ataladi.
11. Yuqori oqim promotor elementi: promouter faoliyatida tartibga soluvchi rol o'ynaydigan DNK ketma-ketligiga ishora qiladi, masalan, -10 mintaqasida TATA, -35 mintaqasida TGACA, kuchaytirgichlar va attenuatorlar.
12. DNK probi: noma'lum ketma-ketliklarni aniqlash va maqsadli genlarni tekshirish uchun keng qo'llaniladigan ma'lum ketma-ketlikka ega bo'lgan DNKning etiketli segmenti.
13. SD ketma-ketligi: Bu translatsiyani tartibga soluvchi ribosoma va mRNKning bog'lanish ketma-ketligi.
14. Monoklonal antikor: faqat bitta antijenik determinantga qarshi harakat qiladigan antikor.
15. Kosmid: Bu sun'iy ravishda tuzilgan ekzogen DNK vektori bo'lib, fagning har ikki uchida COS hududlarini saqlaydi va plazmid bilan bog'lanadi.
16. Moviy-oq nuqta skriningi: LacZ geni (b-galaktosidazani kodlovchi), ferment ko'k hosil qilish uchun X-gal (5-bromo-4-xloro-3-indol-b-D-galaktozid) xromogen substratni parchalashi mumkin, shuning uchun shtammni ko'k rangga aylantiradi.Ekzogen DNK kiritilganda, LacZ genini ifodalab bo'lmaydi va shtamm oq rangga ega bo'lib, rekombinant bakteriyalarni ko'rish uchun.Bu ko'k-oq skrining deb ataladi.
17. Cis-ta'sir qiluvchi element: DNKdagi genlar ifodasini tartibga soluvchi asoslarning o'ziga xos ketma-ketligi.
18. Klenow fermenti: DNK polimeraza I ning katta qismi, bundan tashqari 5' 3' ekzonukleaza faolligi DNK polimeraza I holoenzimidan chiqariladi.
19. Anchored PCR: bir uchida ma'lum ketma-ketlik bilan qiziqtirgan DNKni kuchaytirish uchun ishlatiladi.Noma'lum ketma-ketlikning bir uchiga poly-dG dumi qo'shildi, so'ngra poli-dC va ma'lum ketma-ketlik PCR kuchaytirish uchun primer sifatida ishlatilgan.
20. Fusion oqsili: Eukaryotik oqsilning geni ekzogen gen bilan bog'liq bo'lib, asl gen oqsili va ekzogen oqsilning tarjimasidan tashkil topgan oqsil bir vaqtning o'zida ifodalanadi.
Boshqa molekulyar biologiya atamalari
1. DNKning fizik xaritasi DNK molekulasining (cheklovchi endonukleaza bilan hazm qilingan) bo'laklarining joylashish tartibidir.
2. RNazning parchalanishi ikki turga (avtokataliz) va (geterokataliz) bo'linadi.
3. Prokaryotlarda uchta boshlang'ich omil mavjud (IF-1), (IF-2) va (IF-3).
4. Transmembran oqsillari yo'l-yo'riqni talab qiladi (signal peptidlari) va oqsil şaperonlarining roli (peptid zanjirini oqsilning mahalliy konformatsiyasiga katlamada yordam beradi).
5. Promotorlardagi elementlarni odatda ikki turga bo'lish mumkin: (asosiy promotor elementlari) va (yuqoridagi promotor elementlari).
6. Molekulyar biologiyaning tadqiqot mazmuni asosan uch qismdan iborat: (tuzilmaviy molekulyar biologiya), (gen ifodasi va regulyatsiyasi) va (DNK rekombinatsiyasi texnologiyasi).
7. DNKning genetik material ekanligini ko'rsatadigan ikkita asosiy tajribalar (sichqonlarning pnevmokokk infektsiyasi) va (Escherichia coli T2 fag infektsiyasi).potentsial).
8. HnRNK va mRNK o'rtasida ikkita asosiy farq bor: (hnRNK mRNKga aylanish jarayonida birlashtiriladi), (mRNKning 5' uchi m7pGppp qopqog'i bilan qo'shiladi va mRNK kislotasi (polya) dumining 3' uchida qo'shimcha poliadenilatsiya mavjud).
9. Proteinning ko'p bo'linma shaklining afzalliklari (subbirlik DNKdan foydalanishning iqtisodiy usuli), (oqsil sintezidagi tasodifiy xatolarning oqsil faolligiga ta'sirini kamaytirishi mumkin), (faoliyat juda samarali va tez ochilishi va yopilishi mumkin).
10. Protein katlama mexanizmining asosiy mazmuni birinchi yadrolanish nazariyasi (yadrolanish), (strukturaviy boyitish), (yakuniy qayta tartibga solish) kiradi.
11. Galaktoza bakteriyalarga ikki tomonlama ta'sir ko'rsatadi;bir tomondan (u hujayra o'sishi uchun uglerod manbai sifatida ishlatilishi mumkin);boshqa tomondan (u ham hujayra devorining tarkibiy qismidir).Shuning uchun, fon darajasida doimiy sintez uchun cAMP-CRP-mustaqil promouter S2 kerak;shu bilan birga, yuqori darajadagi sintezni tartibga solish uchun cAMP-CRP-ga bog'liq S1 promouteri kerak.Transkripsiya (S2) dan G bilan va (S1) dan G holda boshlanadi.
12. Rekombinant DNK texnologiyasi (gen klonlash) yoki (molekulyar klonlash) sifatida ham tanilgan.Yakuniy maqsad (bir organizmdagi DNK genetik ma'lumotlarini boshqa organizmga o'tkazish).Oddiy DNK rekombinatsiyasi tajribasi odatda quyidagi bosqichlarni o'z ichiga oladi: (1) Donor organizmning maqsadli genini (yoki ekzogen genini) ajratib oling va uni boshqa DNK molekulasi (klonlash vektori) bilan enzimatik ravishda bog'lab, yangi rekombinant DNK molekulasini hosil qiling.② Rekombinant DNK molekulasi qabul qiluvchi hujayraga o'tkaziladi va qabul qiluvchi hujayrada replikatsiya qilinadi.Bu jarayon transformatsiya deb ataladi.③ Rekombinant DNKni o'zlashtirgan qabul qiluvchi hujayralarni ko'rib chiqing va aniqlang.④Tashqi yordam geni ifodalanganligini aniqlash uchun ko'p miqdorda rekombinant DNK o'z ichiga olgan hujayralarni o'stiring.
13. Plazmid replikatsiyasining ikki turi mavjud: xost hujayra oqsili sintezi tomonidan qattiq nazorat qilinadiganlari (qattiq plazmidlar), xost hujayralarining oqsil sintezi qattiq nazorat qilinmaydiganlari esa (boʻshashgan plazmidlar) deb ataladi.
14. PCR reaktsiya tizimi quyidagi shartlarga ega bo'lishi kerak: a.Ajraladigan maqsadli genning ikkita ipining har bir uchida bir-birini to'ldiruvchi ketma-ketliklarga ega DNK primerlari (taxminan 20 ta asos).b.Termik barqarorlikka ega fermentlar, masalan: TagDNK polimeraza.c, dNTPd, shablon sifatida qiziqishning DNK ketma-ketligi
15. PCR ning asosiy reaktsiya jarayoni uch bosqichni o'z ichiga oladi: (denaturatsiya), (tavlanish) va (kengayish).
16. Transgen hayvonlarning asosiy jarayoni odatda quyidagilarni o'z ichiga oladi: ①Urug'langan tuxum yoki embrion o'zak hujayra yadrosiga klonlangan begona genni kiritish;② Embrion urug'langan tuxum yoki embrion ildiz hujayrani ayol bachadoniga ko'chirib o'tkazish;③To'liq embrion rivojlanish va o'sish Chet genlarga ega bo'lgan avlodlar uchun;④ Yangi homozigot liniyalarni ko'paytirish uchun begona oqsillarni ishlab chiqarishi mumkin bo'lgan bu hayvonlardan naslchilik mollari sifatida foydalaning.
17. Gibridoma hujayra chiziqlari (taloq B) hujayralarni (miyelom) hujayralar bilan gibridlash orqali hosil bo'ladi va (taloq hujayralari) gipoksantindan foydalanishi va (suyak hujayralari) hujayra bo'linish funktsiyalarini ta'minlay olishi sababli, ular HAT muhitida o'stirilishi mumkin.o'sadi.
18. Tadqiqotning chuqurlashishi bilan antikorlarning birinchi avlodi (poliklonal antikorlar), ikkinchi avlod (monoklonal antikorlar), uchinchi avlod (genetik muhandislik antikorlari) deb ataladi.
19. Hozirgi vaqtda hasharotlar viruslarining genetik muhandisligi asosan bakulovirusga qaratilgan bo'lib, u (ekzogen toksin geni) kiritilishida namoyon bo'ladi;(hasharotlarning normal hayot aylanishini buzadigan genlar);(virus genlarining modifikatsiyasi).
20. Sutemizuvchilarning RNK polimeraza II promotoridagi TATA, GC va CAAT umumiy elementlariga mos keladigan trans-aktyor oqsil omillari mos ravishda (TFIID), (SP-1) va (CTF/NF1).
yigirma bir.RNK polimeraza Ⅱ asosiy transkripsiya omillari TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E va ularning bog’lanish ketma-ketligi: (D, A, B, E).Bunda TFII-D funktsiyasi (TATA qutisiga bog'langan).
yigirma ikki.DNK bilan bog'langan transkripsiya omillarining aksariyati dimerlar shaklida ishlaydi.DNK bilan bog'langan transkripsiya omillarining funktsional sohalari odatda quyidagi (spiral-burilish-spiral), (rux barmoq naqshlari), (asosiy-leytsin) fermuar naqshlaridir.
yigirma uch.Cheklovli endonukleaza boʻlinish rejimining uchta turi mavjud: (simmetriya oʻqining 5ʻ tomonida 5’ yopishqoq uchlarini hosil qilish uchun kesib oling), (simmetriya oʻqining 3’ tomonida 3’ yopishqoq uchlarini hosil qilish uchun kesib oling (tekis segmentlarni hosil qilish uchun simmetriya oʻqida kesib oling) ).
yigirma to'rt.Plazmid DNK uch xil konfiguratsiyaga ega: (SC konfiguratsiyasi), (oc konfiguratsiyasi), (L konfiguratsiyasi).Elektroforezda birinchisi (SC konfiguratsiyasi).
25. Ekzogen gen ekspresyon tizimlari, asosan, (Escherichia coli), (Achitqi), (Hasharotlar) va (Sutemizuvchilar hujayralari jadvali).
26. Transgen hayvonlar uchun keng tarqalgan usullar: (retrovirus infektsiyasi usuli), (DNK mikroin'ektsiya usuli), (embrion ildiz hujayralari usuli).
Ilova Molekulyar biologiya
1. 5 dan ortiq RNKning funksiyalarini ayting?
Transfer RNK tRNK Transfer aminokislota Ribosoma RNK rRNK Ribosoma messenjer RNK mRNK Protein sintez shabloni Geterogen yadro RNK hnRNK etuk mRNKning kashshofi kichik yadro RNK snRNK hnRNK qo'shilishida ishtirok etadi RNA-SLNARNA-sintezlangan kichik protein RNA-SLNARNA-sitoplazma/ o'lchovli signalni aniqlash tanasi komponentlari Antisens RNK anRNK/micRNK Gen ifodasini tartibga soladi Ribozim RNK Enzimatik faol RNK
2. Prokaryotik va eukaryotik promotorlarning asosiy farqi nimada?
Prokaryotik TTGACA --- TATAAT------Boshlash joyi-35 -10 Eukaryotik kuchaytirgich---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Boshlash joyi-110 -70 -25
3. Tabiiy plazmidlarni sun’iy qurishning asosiy jihatlari nimalardan iborat?
Tabiiy plazmidlar ko'pincha nuqsonlarga ega, shuning uchun ular genetik muhandislik uchun tashuvchi sifatida foydalanish uchun mos emas va ularni o'zgartirish va qurish kerak: a.Ikki yoki undan ko'p kabi mos tanlash marker genlarini qo'shing, ularni tanlash uchun ishlatish oson, odatda antibiotik genlari.b.Rekombinatsiyani osonlashtirish uchun tegishli fermentlarni kesish joylarini oshiring yoki kamaytiring.c.Uzunlikni qisqartiring, keraksiz bo'laklarni kesib oling, import samaradorligini oshiring va yuklash hajmini oshiring.d.Replikonni qattiqdan bo'shgacha, kamroq nusxadan ko'proq nusxaga o'zgartiring.e.Genetik muhandislikning maxsus talablariga muvofiq maxsus genetik elementlarni qo'shing
4. To'qimalarga xos kDNKni differentsial skrining usuliga misol keltiring?
Ikki hujayra populyatsiyasi tayyorlanadi, maqsadli gen hujayralardan birida ifodalanadi yoki yuqori darajada ifodalanadi va maqsadli gen boshqa hujayrada ifodalanmaydi yoki past darajada ifodalanadi, so'ngra gibridizatsiya va taqqoslash yo'li bilan maqsadli gen topiladi.Masalan, o'smalarning paydo bo'lishi va rivojlanishi davomida o'simta hujayralari oddiy hujayralarga qaraganda turli xil ifoda darajalariga ega mRNKlarni taqdim etadi.Shuning uchun o'simta bilan bog'liq genlar differentsial gibridizatsiya orqali tekshirilishi mumkin.Induksiya usulidan ekspressiyasi induktsiya qilingan genlarni aniqlash uchun ham foydalanish mumkin.
5. Gibridoma hujayra chiziqlarini yaratish va skrining qilish?
Taloq B hujayralari + miyelom hujayralari, hujayra sintezini rag'batlantirish uchun polietilen glikol (PEG) qo'shing va HAT muhitida (gipoksantin, aminopterin, T o'z ichiga olgan) o'stirilgan taloq B-mieloma termoyadroviy hujayralari oziqlanishni davom ettiradi.Hujayra sintezi tarkibiga quyidagilar kiradi: taloq-taloq sintezi hujayralari: o'sishga qodir emas, taloq hujayralarini in vitroda etishtirish mumkin emas.Suyak-suyak sintezi hujayralari: gipoksantinni ishlata olmaydi, lekin folat reduktaza yordamida purinni ikkinchi yo'l orqali sintez qilishi mumkin.Aminopterin foliy reduktazasini inhibe qiladi va shuning uchun o'sishi mumkin emas.Suyak-taloq termoyadroviy hujayralari: HATda o'sishi mumkin, taloq hujayralari hipoksantindan foydalanishi mumkin va suyak hujayralari hujayra bo'linish funktsiyasini ta'minlaydi.
6. Dideoksi-terminal tugatish usuli (Sanger usuli) bilan DNKning birlamchi strukturasini aniqlash tamoyili va usuli qanday?
Printsip DNKning kengayishini tugatish uchun nukleotid zanjiri terminatoridan - 2,,3,-dideoksinukleotiddan foydalanishdan iborat.DNK zanjiriga kiritilgandan so'ng, 3/5 / fosfodiester bog'larini hosil qilish uchun zarur bo'lgan 3-OH mavjud emasligi sababli, DNK zanjirini yanada kengaytirib bo'lmaydi.Baza juftligi printsipiga ko'ra, har doim DNK polimeraza odatdagi kengaytirilgan DNK zanjirida ishtirok etish uchun dNMP kerak bo'lganda, ikkita imkoniyat mavjud, biri ddNTPda ishtirok etishdir, bu deoksinukleotid zanjirining kengayishini tugatishga olib keladi;ikkinchisi dNTPda ishtirok etishdir, shuning uchun DNK zanjiri keyingi ddNTP qo'shilmaguncha davom etishi mumkin.Ushbu usulga ko'ra, ddNTP bilan tugaydigan turli uzunlikdagi DNK fragmentlari guruhini olish mumkin.Usul mos ravishda ddAMP, ddGMP, ddCMP va ddTMP to'rt guruhga bo'linadi.Reaksiyadan so'ng, poliakrilamid jel elektroforezi suzish bantlari bo'yicha DNK ketma-ketligini o'qiy oladi.
7. Aktivator oqsilining (CAP) transkripsiyaga ijobiy regulyatsiya ta'siri qanday?
Tsiklik adenilat (cAMP) retseptorlari oqsili CRP (cAMP retseptorlari oqsili), cAMP va CRP birikmasidan hosil bo'lgan kompleks CAP (cAMP faollashtirilgan protein) deb ataladi.E. coli glyukoza yetishmaydigan muhitda o'stirilganda, CAP sintezi kuchayadi va CAP laktoza (Lac) kabi promotorlarni faollashtirish funktsiyasiga ega.Ba'zi CRP-ga bog'liq promouterlarda umumiy promouterlarda mavjud bo'lgan tipik -35 mintaqaviy ketma-ketlik xususiyati (TTGACA) mavjud emas.Shuning uchun RNK polimeraza bilan bog'lanishi qiyin.CAP (funktsiya) mavjudligi: ferment va promotorning bog'lanish konstantasini sezilarli darajada yaxshilashi mumkin.U asosan quyidagi ikki jihatni ko'rsatadi: ① CAP promotorning konformatsiyasini va ferment bilan o'zaro ta'sirini o'zgartirib, ferment molekulasini to'g'ri yo'naltirishga yordam beradi, shuning uchun -10 mintaqasi bilan birlashadi va -35 mintaqasi funktsiyasini almashtirish rolini o'ynaydi.②CAP, shuningdek, RNK polimerazasining DNKning boshqa joylariga ulanishini inhibe qilishi mumkin va shu bilan uning o'ziga xos promouteriga ulanish ehtimolini oshiradi.
8. Odatda DNK rekombinatsiyasi tajribasiga qanday bosqichlar kiradi?
a.Donor organizmning maqsadli genini (yoki ekzogen genini) ajratib oling va yangi rekombinant DNK molekulasini hosil qilish uchun uni boshqa DNK molekulasi (klonlash vektori) bilan enzimatik ravishda bog'lang.b.Rekombinant DNK molekulasini qabul qiluvchi hujayraga o'tkazing va uni replikatsiya qiling va uni qabul qiluvchi hujayrada saqlang.Bu jarayon transformatsiya deb ataladi.c.Rekombinant DNKni o'zlashtirgan qabul qiluvchi hujayralarni ko'ring va aniqlang.d.Chet el yordami geni ifodalanganligini aniqlash uchun rekombinant DNKni o'z ichiga olgan hujayralarni ommaviy madaniyat.
9. Gen kutubxonasini qurish Rekombinantlarni skrining qilishning uchta usuli keltirilgan va jarayon qisqacha tavsiflangan.
Antibiotiklarga qarshilik skriningi, qarshilikning insertion inaktivatsiyasi, ko'k-oq nuqta skriningi yoki PCR skriningi, differentsial skrining, DNK probi Ko'pgina klonlash vektorlari antibiotiklarga qarshilik genlarini (anti-ampitsillin, tetratsiklin) olib boradi.Plazmid ichak tayoqchasiga o'tkazilganda, bakteriyalar qarshilikka ega bo'ladi va o'tkazilmaganlarda qarshilik bo'lmaydi.Lekin u qayta tashkil etilganmi yoki yo'qmi, ajrata olmaydi.Ikki qarshilik genini o'z ichiga olgan vektorda, agar genlardan biriga begona DNK bo'lagi kiritilsa va genning inaktivatsiyasiga olib keladigan bo'lsa, ijobiy rekombinantlarni tekshirish uchun turli dorilarni o'z ichiga olgan ikkita plastinka nazorati ishlatilishi mumkin.Misol uchun, pUC plazmidida ko'k rang hosil qilish uchun X-gal (5-bromo-4-xloro-3-indol-b-D-galaktozid) xromogen substratni parchalashi mumkin bo'lgan LacZ geni (b-galaktosidazani kodlash) mavjud, bu esa shtammni ko'k rangga aylantiradi.Chet el DNKsi kiritilganda, LacZ geni ifodalanishi mumkin emas va shtamm oq rangga ega bo'lib, rekombinant bakteriyalarni ko'rish uchun.
10. Embrion ildiz hujayralari orqali transgen hayvonlarni olishning asosiy jarayonini tushuntiring?
Embrion ildiz hujayralari (EM) embrion rivojlanish davridagi embrion hujayralar bo'lib, ular sun'iy ravishda o'stirilishi va ko'payishi mumkin va boshqa turdagi hujayralarga differensiallanish funktsiyasiga ega.ES hujayralarining madaniyati: Blastotsistning ichki hujayra massasi ajratilgan va ekilgan.ES oziqlantiruvchisiz qatlamda o'stirilganda, u mushak hujayralari va N hujayralari kabi turli funktsional hujayralarga ajralib chiqadi.Fibroblastlarni o'z ichiga olgan muhitda etishtirilganda, ES farqlash funktsiyasini saqlab qoladi.ESni genetik manipulyatsiya qilish mumkin va uning differentsiatsiya funktsiyasi tasodifiy integratsiya muammosini hal qiladigan differentsiatsiya funktsiyasiga ta'sir qilmasdan birlashtirilishi mumkin.Embrion ildiz hujayralariga ekzogen genlarni kiriting, so'ngra homilador urg'ochi sichqonlarning bachadoniga implantatsiya qiling, kuchuklarga aylanadi va gomozigotli sichqonlarni olish uchun kesib o'ting.
