PCR reaktsiyasining ajoyib xususiyati uning katta kuchaytirish qobiliyati va juda yuqori sezuvchanligidir.PCR ishlashi va aniqlash samaradorligini oshirish uchun biz PCR kuchaytirish qobiliyatini va aniqlash sezuvchanligini yaxshilashga intilamiz, ammo bosh og'rig'i tajriba jarayonida.Ko'pincha noto'g'ri pozitivlar paydo bo'ladi va juda oz miqdordagi namunaning o'zaro kontaminatsiyasi yoki PCR mahsulotining ifloslanishi eksperimentda noto'g'ri ijobiy natijalarga olib kelishi mumkin.
PCR mahsulotining kontaminatsiyasining besh turi
PCR kontaminatsiyasining ko'plab sabablari bor, ularni taxminan quyidagi toifalarga bo'lish mumkin:
Namunaning ifloslanishi, asosan, namunani yig'ish uchun idishning ifloslanishidan kelib chiqadi yoki namuna qo'yilganda, bo'shashmasdan muhrlanganligi sababli idishdan sizib chiqadi yoki namuna idishning tashqi tomoniga yopishib qoladi, bu esa o'zaro ifloslanishni keltirib chiqaradi;Kontaminatsiya namunalar orasidagi ifloslanishga olib keladi;ba'zi mikrob namunalari, ayniqsa viruslar, aerozollar bilan tarqalishi yoki aerozollar hosil qilishi mumkin, natijada o'zaro ifloslanish paydo bo'ladi.
Asosiy sabab, PCR reagentlarini tayyorlash jarayonida namuna tabancası, idish, ikki marta distillangan suv va boshqa eritmalar PCR nuklein kislotasi shablonlari bilan ifloslangan.
Molekulyar biologiya laboratoriyalarida va klonlangan plazmidlarni ijobiy nazorat sifatida ishlatadigan ba'zi laboratoriyalarda klonlangan plazmid bilan ifloslanish muammosi ham keng tarqalgan.Chunki birlik hajmdagi klonlash plazmidining tarkibi ancha yuqori bo‘lib, tozalash jarayonida ko‘proq asboblar va reagentlar kerak bo‘ladi va tirik hujayralardagi plazmid tirik hujayralarning kuchli o‘sishi va ko‘payish qobiliyati tufayli ifloslanish ehtimoli juda katta.
Kuchaytirilgan mahsulotlarning ifloslanishi PCR reaktsiyalarida eng keng tarqalgan ifloslanish muammosidir.PCR mahsulotining nusxa ko'chirish miqdori katta (odatda 1013 nusxa/ml) bo'lganligi sababli, bu PCR aniqlash nusxasi soni chegarasidan ancha yuqori, PCR mahsuloti ifloslanishining juda oz miqdori noto'g'ri ijobiy natijalarga olib kelishi mumkin.
Aerozol bilan ifloslanish PCR mahsulotlarining ifloslanishining eng ko'p uchraydigan shakli bo'lib, uni e'tiborsiz qoldirish ham oson.U suyuqlik yuzasi va havo orasidagi ishqalanish natijasida hosil bo'ladi.Odatda, aerozol bilan ifloslanish qopqoq ochilganda, namuna aspiratsiya qilinganda yoki hatto reaksiya trubkasi kuchli silkitilganda ham paydo bo'lishi mumkin.Hisob-kitoblarga ko'ra, aerozol zarrasi 48 000 nusxani o'z ichiga olishi mumkin, shuning uchun u keltirib chiqaradigan ifloslanish alohida e'tiborga loyiq muammodir.
Xususan, sinov laboratoriyalari ko'pincha ma'lum bir genni tekshirish uchun bir xil primerlardan foydalanadi.Vaqt o'tishi bilan laboratoriya maydonida PCR mahsulotining ko'p miqdorda ifloslanishi sodir bo'ladi.Bunday ifloslanish sodir bo'lgandan so'ng, uni qisqa vaqt ichida yo'q qilish qiyin.
Birinchi uch turdagi ifloslanish uchun biz oldini olish uchun samarali vositalardan foydalanishimiz mumkin, ammo PCR mahsulotlaridan kelib chiqadigan ifloslanishning oldini olish qiyin, ayniqsa nostandart PCR laboratoriyalarini qurishda.PCR jarayonida pipetka uchi suyuqlikni so'rib, puflaganda va PCR trubkasi qopqog'i ochilganda aerozol hosil bo'ladi.Aerozol tomonidan olib boriladigan DNK molekulalarini (bir aerozol o'n minglab DNKni olib yurishi mumkin) yo'q qilish qiyin, chunki ular havoda suzadi.PCR tajribalarining navbatdagi bosqichi kiritilgandan so'ng, noto'g'ri ijobiy natijalar muqarrar ravishda yuzaga keladi.
Quyidagi rasmda ko'rsatilganidek, salbiy nazorat ham tegishli qiziqish doirasini kuchaytirdi:
Bu erda PCR ifloslanishi va oldini olish bo'yicha ushbu mavzuning birinchi qismi keltirilgan.Keyingi sonda sizga "PZR mahsulotining ifloslanishining oldini olish" ikkinchi qismi taqdim etiladi, shuning uchun bizni kuzatib boring!
Xabar berish vaqti: 2017 yil 25 iyul
