Eksperiment xodimlarining xatti-harakatlarini standartlashtirish uchun PCR eksperimenti SOPni o'rnating.
Eksperimentator foydalanish tartib-qoidalariga qat'iy rioya qiladi va inson omillari sabab bo'lishi mumkin bo'lgan PCR ifloslanishini minimallashtiradi yoki ifloslanishning paydo bo'lishining oldini oladi.Bundan tashqari, eksperimentator tegishli kasbiy bilim va ko'nikmalarga ega bo'lishi kerak, shu jumladan tegishli asbob-uskunalarni boshqarish, butun ish jarayonini aniqlashtirish, ifloslanishni davolash usullari va laboratoriya sifatini nazorat qilish usullarini o'zlashtirish va sinov natijalarini to'g'ri talqin qilish qobiliyati.
Standart PCR laboratoriyasini yarating.
PCR laboratoriyasi printsipial jihatdan to'rtta sohaga bo'lingan, ya'ni reagent tayyorlash maydoni, namunani qayta ishlash maydoni, kuchaytirish maydoni va kuchaytirish mahsulotini tahlil qilish maydoni.Dastlabki ikkita maydon kuchaytirilishdan oldingi maydonlar, oxirgi ikki maydon esa kuchaytirishdan keyingi maydonlardir.Kuchaytirishdan oldingi zonani va kuchaytirishdan keyingi zonani qat'iy ravishda ajratish kerak.Tajriba materiallari, reagentlar, qayd qog'ozi, qalamlar, tozalovchi materiallar va boshqalar faqat kuchaytirilishdan oldingi maydondan kuchaytirilgandan keyingi maydonga, ya'ni reagent tayyorlash maydonidan → namunani qayta ishlash maydonidan → kuchaytirish maydonidan → kuchaytirish mahsulotini tahlil qilish maydonidan oqishi mumkin va orqaga oqmasligi kerak.Laboratoriyadagi havo oqimi ham kuchaytirilishdan oldingi hududdan kuchaytirilgandan keyingi maydonga oqib o'tishi kerak, orqaga oqmasligi kerak.Ideal PCR laboratoriya dizayni quyida ko'rsatilgan:
Shakl A: Bufer xonasida salbiy bosim bilan ideal PCR laboratoriyasini o'rnatish rejimi
Shakl B: Bufer xonasida ijobiy bosim bilan ideal PCR laboratoriyasini o'rnatish rejimi
Shakl A va B-rasmda keltirilgan PCR laboratoriyasini o'rnatish diagrammalari yanada ideal o'rnatish rejimi bo'lishi kerak va sharoitlari bo'lgan laboratoriya dizayn uchun ushbu rejimga murojaat qilishi mumkin.Oddiy laboratoriyalar uchun PCR kuchaytirish maydoni va mahsulotni tahlil qilish maydonini ajratish tavsiya etiladi va namunani tayyorlash maydonida va PCR kuchaytiruvchi maydonda qopqoqning ochilishini imkon qadar qisqartirish kerak.Esda tuting: Mahsulotni tahlil qilish zonasidagi mahsulotlar va eksperimental materiallarni namuna tayyorlash maydoniga va PCR kuchaytirish maydoniga olib borish qat'iyan man etiladi.
Agar laboratoriya faqat PCRni aniqlash va identifikatsiyalashni amalga oshirsa, an'anaviy PCR o'rniga floresan miqdoriy PCRdan foydalanish tavsiya etiladi.
Floresan miqdoriy PCRni aniqlash natijalari floresan signallari bilan to'planishi va tahlil qilinishi mumkin, shuning uchun reaktsiyadan keyin elektroforez uchun qopqoqni ochishning hojati yo'q, bu aerozollarni hosil qilish uchun reaktsiya mahsulotlarining oqishi natijasida yuzaga kelgan PCR mahsulotining ifloslanishini oldini oladi.Jel elektroforezining yuklash bosqichida qopqoq teshiklari sonini ko'paytirsangiz, aerozol bilan ifloslanish paydo bo'lishi mumkin.Miqdoriy PCRni qo'llashni rag'batlantirish va asta-sekin sifatli PCRni almashtirish tavsiya etiladi.
PCR reaktsiyasi uchun UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimi qo'llaniladi.
Tizim dTTP o'rniga dUTP dan foydalanadi.PCR reaktsiyasidan so'ng barcha PCR mahsulotlari (DNK fragmentlari) dUTP bilan birlashtiriladi;PCR reaktsiyasining navbatdagi bosqichida tizimga qo'shilgan UNG fermenti PCRdan oldin 5 daqiqa davomida 37 ° C da inkubatsiya qilinadi, bu dUTP o'z ichiga olgan barcha DNK fragmentlarini maxsus ravishda parchalashi va keyin PCR reaktsiyasini amalga oshirishi mumkin.Bu PCR mahsulotlaridan kelib chiqqan aerozol ifloslanishini butunlay olib tashlashi mumkin.Effekt quyidagi rasmda ko'rsatilgan:
Eslatma: To'g'ridan-to'g'ri PCR seriyasi uchun siz Foregene anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimining seriyali mahsulotlarini tanlashingiz mumkin.Taklif qiling
Keng miqyosli genotiplash sinovlarini o'tkazadigan laboratoriyalar uchun oqilona laboratoriyalar qurishdan tashqari, reagentlarni sinash uchun UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimidan foydalanish tavsiya etiladi.
Eslatma: Ushbu tizimdan foydalanish allaqachon yuzaga kelgan PCR mahsulotining ifloslanishini bartaraf eta olmaydi.Shuning uchun, UNG tizimi tegishli test boshida ishlatilishi kerak va PCR mahsulotlarining ifloslanishini oldini olish uchun UNG tizimi PCR kuchaytirilishi uchun ishlatilishi kerak.
Keng ko'lamli sinovlarni o'tkazishda Foregene Direct PCR-UNG tizimidan foydalanish tavsiya etiladi, masalan:
O'simlik barglari to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；
O'simlik urug'i to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；
Hayvon to'qimalarining to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；
Sichqoncha quyruq to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Bu Foregene to'plamlari seriyasinafaqat tez va keng miqyosda PCR aniqlashni amalga oshirishi, balki PCR mahsulotining ifloslanishini samarali oldini olish va nazorat qilish mumkin.
Yuborilgan vaqt: 19-mart-2021-yil
