Muammoni tahlil qilish bo'yicha qo'llanma

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Past rentabellik yoki DNK yo'qligi

Odatda genomik DNKning hosildorligiga ta'sir qiluvchi ko'plab omillar mavjud, jumladan, namunaning manbai, namunaning yoshi, namunani saqlash sharoitlari va operatsiya.

Ekstraksiya paytida genomik DNKni olish mumkin emas edi

1. To'qimalar namunalari noto'g'ri saqlanadi yoki juda uzoq vaqt saqlanadi, bu genomik DNKning degradatsiyasiga olib keladi.

Tavsiya: To'qimalar namunalarini suyuq azotda yoki -20 da saqlang°C;genomik DNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan namunalardan foydalanishga harakat qiling.

2. Namuna miqdori juda kam bo'lsa, tegishli genomik DNK olinmasligiga olib kelishi mumkin.

Taklif: Uzoq vaqt davomida saqlangan yoki jiddiy genomik DNK degradatsiyasiga ega bo'lgan to'qimalar namunalari uchun katta genomik DNKni ajratib olish uchun to'qima namunalari miqdori mos ravishda oshirilishi mumkin.Namuna miqdori DNK ehtiyojlariga qarab aniqlanishi mumkin, ammo yangi namuna 100 mg dan oshmasligi kerak va quruq namuna 30 mg dan oshmasligi kerak.

3. Namuna suyuq azot bilan maydalanmaydi yoki suyuq azotdan keyin juda uzoq vaqt davomida joylashtirilmaydi.

Taklif: DNK ekstraktsiyasi vaqtida hujayra devorini buzish uchun namunani suyuq azot bilan to'liq maydalash kerak;silliqlashdan so'ng, iltimos, namuna kukunini 65 ga oldindan qizdirilgan PL1 ga o'tkazing°C imkon qadar tezroq (tuproq kukuni eritilgandan so'ng, genomik DNK tez parchalana boshlaydi) .

4. Foregene Proteazni noto'g'ri saqlash natijasida faollik kamayadi yoki inaktivlanadi.

Tavsiya: Foregene Proteazni saqlash shartlarini tasdiqlang yoki uni fermentativ gidroliz uchun yangi Foregene Proteaz bilan almashtiring.

5. To'plam noto'g'ri saqlangan yoki juda uzoq vaqt davomida saqlanadi, bu to'plamdagi ba'zi komponentlarning ishdan chiqishiga olib keladi.

Tavsiya: Tegishli operatsiyalar uchun yangi o'simlik genomik DNK ekstraktsiyasi to'plamini sotib oling.

6. To'plamdan noto'g'ri foydalanish.

Taklif: O'simlik genomik DNKsini olish va tozalash uchun namunalar uchun mo'ljallangan O'simlik DNK izolyatsiyasi to'plamini sotib oling.

7. Bufer WB a qo'shmasdansuvsiz etanol.

Tavsiya: Bufer WB ga to'g'ri mutlaq etanol hajmini qo'shganingizga ishonch hosil qiling.

8. Elyuent kremniy membranasiga to'g'ri tomizilmagan.

Taklif: 65 ga oldindan qizdirilgan eluentni qo'shing℃silikagel membranasining o'rtasiga tomchilab yuboring va elutsiya samaradorligini oshirish uchun uni xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.

Past rentabelli genomik DNKni olish uchun ekstraktsiya

1. Namuna noto'g'ri saqlangan yoki juda uzoq vaqt davomida saqlanadi, natijada genomik DNK degradatsiyasi sodir bo'ladi.

Tavsiya: To'qimalar namunalarini -20 da saqlang℃;genomik DNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan to'qimalar namunalaridan foydalanishga harakat qiling.

2. Agar to'qima namunalari miqdori juda kichik bo'lsa, ekstrakte qilingan genomik DNK kamroq bo'ladi.

Taklif: Ba'zi o'simliklar namunalari suvga boy, masalan, suv o'tlari va boshqalar kabi suv o'simliklari, dozani mos ravishda oshirish yoki operatsiyadan oldin suvni bir oz suvsizlantirish mumkin.

3. Namunalar suyuq azot bilan yaxshilab maydalanmagan yoki silliqlashdan keyin xona haroratida juda uzoq vaqt davomida qoldirilmagan.

Taklif: Suyuq azotni maydalash etarli bo'lishi kerak va namuna hujayra devorini iloji boricha sindirish kerak;silliqlashdan so'ng darhol namuna kukuni 65 ga o'tkazilishi kerak℃keyingi bosqich uchun oldindan qizdirilgan bufer PL1.

4. To'g'ri to'plamdan foydalanmaslik.

Tavsiya: O'simlik genomik DNKsini ajratib olish va tozalash uchun maxsus o'simlik DNK izolyatsiyasi to'plamidan foydalaning.

5. Foregene Proteazni noto'g'ri saqlash natijasida faollik kamayadi yoki faollashtirilmaydi.

Tavsiya: Foregene Proteazni saqlash shartlarini tasdiqlang yoki uni fermentativ gidroliz uchun yangi Foregene Proteaz bilan almashtiring.

6. Eluent muammosi

Tavsiya: Elyusiya uchun Buffer EB dan foydalaning;agar ddH dan foydalansangiz₂O yoki boshqa elimentlar, elimning pH qiymati 7,0-8,5 orasida ekanligiga ishonch hosil qiling.

7. Eluent to'g'ri tomizilmagan

Taklif: Iltimos, silika membranasining o'rtasiga elutsiya tomchisini qo'shing va elutsiya samaradorligini oshirish uchun uni xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.

8. Eluent hajmi juda kichik

Taklif: Iltimos, ko'rsatmalarga muvofiq, kamida 100 dan kam bo'lmagan holda, genomik DNKni tozalash uchun elyuentdan foydalaning.mkl.

Past tozaligi bilan olingan genomik DNK

Genomik DNKning past tozaligi quyi oqimdagi tajribalarning muvaffaqiyatsizligi yoki yomon ta'siriga olib keladi, masalan: fermentni kesib bo'lmaydi va maqsadli gen fragmentini PCR orqali olish mumkin emas.

1. Har xil oqsillar bilan ifloslanish, RNK bilan ifloslanish.

Tahlil: Bufer PW ustunni yuvish uchun ishlatilmadi;Bufer PW ustunni to'g'ri santrifüj tezligida yuvish uchun ishlatilmadi.

Taklif: supernatant ustundan o'tganda, supernatantda yog'ingarchilik bo'lmasligini ta'minlashga harakat qiling;tozalash ustunini ko'rsatmalarga muvofiq Buffer PW bilan yuvishni unutmang va bu bosqichni o'tkazib yuborib bo'lmaydi.

2. Nopoklik ionlari bilan ifloslanishi.

Tahlil: Buffer WB yuvish ustuni o'tkazib yuborildi yoki faqat bir marta yuvildi, natijada qoldiq ionli ifloslanish paydo bo'ldi.

Tavsiya: Qolgan ionlarni iloji boricha olib tashlash uchun ko'rsatmalarga muvofiq Buffer WB bilan ikki marta yuvishni unutmang.

3. RNaz bilan ifloslanish.

Tahlil: Buferga ekzogen RNase qo'shiladi;Bufer PW da noto'g'ri yuvish operatsiyasi qoldiq RNase hosil bo'lishiga olib keladi va quyi oqimdagi RNK eksperimental operatsiyalariga, masalan, in vitro transkripsiyasiga ta'sir qiladi.

Taklif: Foregene seriyali nuklein kislotasi ekstraktsiyasi to'plamlari RNKni qo'shimcha RNasesiz olib tashlashi mumkin va O'simlik DNK izolyatsiyasi to'plamidagi barcha reagentlar RNazga muhtoj emas;tozalash ustunini ko'rsatmalarga muvofiq Buffer PW bilan yuvishni unutmang va bu bosqichni o'tkazib yuborib bo'lmaydi.

4. Etanol qoldiqlari.

Tahlil: Tozalash ustunini Buffer WB bilan yuvgandan so'ng, bo'sh kolba santrifüjlash amalga oshirilmadi.

Tavsiya: Bo'sh trubkani to'g'ri santrifüj qilish bo'yicha ko'rsatmalarga amal qiling.

Foydalanish bo'yicha qo'llanma:

O'simlik DNK izolyatsiyasi to'plami bo'yicha qo'llanma