Polisaxaridlar va polifenollarga boy o'simliklar uchun o'simliklarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami Plus umumiy RNK tozalash to'plami
To'plam tavsifi:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Yuqori polisakkarid va polifenol komponentlarini o'z ichiga olgan umumiy o'simlik namunalaridan umumiy RNKni tozalash uchun.
Polisaxaridlar va polifenollarning yuqori miqdori bo'lgan o'simlik namunalaridan yuqori sifatli umumiy RNKni tezda ajratib oling.
RNase-Free DNK-tozalash ustunidan foydalanish
Oddiy - barcha operatsiyalar xona haroratida bajariladi
Tez - operatsiya 30 daqiqada bajarilishi mumkin
Xavfsiz - hech qanday organik reagent ishlatilmaydi 
Texnik xususiyatlari
50 ta tayyorgarlik, 200 ta tayyorgarlik
To'plam Foregene tomonidan ishlab chiqilgan spin ustuni va formulasidan foydalanadi, bu yuqori polisakkaridlar yoki polifenollar tarkibiga ega bo'lgan turli o'simlik to'qimalaridan yuqori toza va yuqori sifatli umumiy RNKni samarali ravishda ajratib olishi mumkin.U genomik DNKni supernatant va to'qima lizatidan osongina olib tashlaydigan DNK-tozalash ustunini ta'minlaydi.Faqat RNK ustuni RNKni samarali bog'lashi mumkin.To'plam bir vaqtning o'zida ko'p sonli namunalarni qayta ishlashga qodir.
Butun tizimda RNase mavjud emas, shuning uchun tozalangan RNK buzilmaydi.Bufer PRW1 va bufer PRW2 olingan RNKning oqsil, DNK, ionlar va organik birikmalar bilan ifloslanmasligini ta'minlaydi.
To'plam komponentlari
| PSL1 buferi, PS buferi, PSL2 buferi |
| PRW1 buferi, PRW2 buferi |
| RNazsiz ddH2O, DNKni tozalash ustuni |
| Faqat RNK ustuni |
Xususiyatlari va afzalliklari
■ Xona haroratida (15-25 ℃) butun jarayon davomida muzli hammomsiz va past haroratli santrifüjsiz ishlash.
■ RNase-Free to'liq to'plami, RNK degradatsiyasi haqida tashvishlanishga hojat yo'q.
■ Ayniqsa, polisaxaridlar va polifenollarning o'simlik namunalaridan RNKni tozalash uchun javob beradi.
■ DNKni tozalash ustuni DNK bilan maxsus bog'lanadi, shuning uchun to'plam DNase qo'shmasdan genomik DNK ifloslanishini olib tashlashi mumkin.
■ Yuqori RNK rentabelligi: faqat RNK ustuni va noyob formulasi RNKni samarali tozalashi mumkin.
■ Tez tezlik: ishlatish oson va 30 daqiqa ichida bajarilishi mumkin.
■ Xavfsizlik: hech qanday organik reagent talab qilinmaydi.
■ Yuqori sifat: Tozalangan RNK fragmentlari yuqori toza, oqsil va boshqa aralashmalardan xoli va turli quyi oqim eksperimental ilovalariga javob berishi mumkin.
Mahsulot parametrlari
■ Pastki oqim ilovalari: birinchi zanjirli cDNK sintezi, RT-PCR, molekulyar klonlash, Northern Blot va boshqalar.
■ Namuna: Polisaxaridlar va polifenollarning yangi yoki muzlatilgan o'simlik to'qimalari
■ Dozaj: 50mg o'simlik to'qimasi
■ Tozalash ustunining maksimal RNK bog'lash qobiliyati: 80 mkg
■ Elutsiya hajmi: 50-200 mkl
Kit ilovasi
U yangi yoki muzlatilgan o'simlik to'qimalarining namunalaridan (ayniqsa, yangi o'simlik barglari to'qimalari) yuqori polisakkarid va polifenol tarkibiga ega bo'lgan umumiy RNKni olish va tozalash uchun javob beradi.
Ish oqimi
Diagramma
Plant Total RNK Isolation Kit Plus 50 mg polisaxaridlar va polifenollarning yangi barglarini qayta ishladi va 5% tozalangan RNK elektroforez bilan sinovdan o'tkazildi.
1: banan
2: Ginkgo
3: Paxta
4: Anor
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plam quruq sharoitda xona haroratida (15-25 ℃) 24 oy davomida saqlanishi mumkin;Agar uni uzoqroq saqlash kerak bo'lsa, uni 2-8 ℃ haroratda saqlash mumkin.
PSL1 tamponini b-merkaptoetanol qo'shgandan keyin 1 oy davomida 4 ℃ haroratda joylashtirish mumkin (uni tajriba vaqtida qo'shish tavsiya etiladi).
Ustun tiqilib qoldi
Ustun ulangandan so'ng, RNK rentabelligi kamayadi yoki hatto RNKni tozalash imkonsiz bo'ladi va olingan RNK massasi past bo'ladi.
Umumiy sabablarni tahlil qilish:
1. Namunaviy tanaffuslar puxta emas.
Namuna sinishi DNK-TOZALASH USTUNI to'liq bloklanishiga olib kelmaydi, shu bilan birga RNK chiqishi va sifatiga ta'sir qiladi.Namunalarni sindirganingizda etarli darajada suyuq azotda tez silliqlash operatsiyasini tavsiya qilamiz, namuna hujayra devorini, hujayra membranasini va boshqa to'qimalarni maydalashga harakat qiling.Poliol polisaxaridlarining o'simlik namunalari uchun Plant Total RNK Isolation KIT PLUS dan foydalanishni tavsiya qilamiz.
2. Ajratilgan namuna supernatantini DNK-tozalash ustuni bilan so'rilganda, hujayra bo'linishi mumkin bo'lgan cho'kma nafas olishi mumkin.
Olingan hujayra bo'laklangan cho'kindilar RNKni adsorbsiyalash operatsiyasi bajarilganda bloklangan FAQAT RNK ustuniga olib keladi (6-bosqichga qarang).Hujayra qoldiqlari so'rilmasligi uchun ushbu supernatantni so'rib olishda ehtiyotkorlik bilan tavsiya qilamiz.
3. Namuna boshlang'ich miqdori juda ko'p.
Namunani haddan tashqari ko'p ishlatish namunaning to'liq bo'linmasligiga yoki bufer PSL1 tomonidan to'liq bo'lmagan hujayra lizisiga olib keladi, natijada tozalash paytida tozalash ustunining bloklanishiga olib keladi.O'simlikning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami Har bir tozalangan operatsiya namunasi 50 mg ni tashkil qiladi.Poliol polisaxaridlarining o'simlik namunalari uchun Plant Total RNK Izolatsiya KIT PLUS ni sinab ko'rishingizni tavsiya qilamiz.
4. Santrifuganing harorati juda past.
Butun RNK izolyatsiyasi va tozalash jarayoni xona haroratida amalga oshiriladi (20-25°C), namuna to'qimalarining suyuq azot bilan parchalanishi bundan mustasno. Ba'zi kriogen sentrifugalarning harorati 20 dan past.℃, bu DNK-tozalash ustuni va/yoki faqat RNK ustunining bloklanishiga olib kelishi mumkin.Agar bu sodir bo'lsa, santrifuga haroratini 20-25 ga qo'ying℃, valizis aralashmasi va/yoki etanol qo'shilgan supernatant 37 ga oldindan qizdirilganligiga ishonch hosil qiling.°C.
Hech qanday RNK olinmaydi yoki RNK rentabelligi past emas
Qayta tiklash samaradorligiga odatda ko'plab omillar ta'sir qiladi, masalan: namunadagi RNK tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.
Quyidagi kabi umumiy sabablarni tahlil qilish:
1.Operatsiya davomida muzli hammom yoki past haroratli (4°C) santrifüjlash amalga oshirildi.
Tavsiya: Xona haroratida ishlang (15-25°C) butun jarayonda muzli hammom va past haroratli sentrifuga qilmang.
2.RNK namunaning noto'g'ri saqlanishi yoki namunaning uzoq muddatli saqlanishi tufayli buzilgan.
Tavsiya: Yangi yig'ilgan namunalar suyuq azotda tez muzlatilishi va keyin -80 ° C da uzoq vaqt saqlanishi kerak, namunalarni qayta-qayta muzlatish va eritishdan saqlaning;yoki darhol namunalarni RNK stabilizatori RNAlater eritmasiga (hayvon namunalari) soling.
3.Namunaning parchalanishi va parchalanishining etarli emasligi tozalash ustunining bloklanishiga olib keladi.
Taklif: Toʻqimalarni maydalashda toʻqima yetarli darajada maydalanganligiga ishonch hosil qiling va uni tezda oldindan tayyorlangan PSL1 tamponiga oʻtkazing (b-ME ning toʻgʻri nisbati qoʻshilganligini tasdiqlang, protseduraning 1-bosqichiga qarang).
4.Eluent noto'g'ri qo'shilgan.
Taklif: RNase-Free ddH2O tozalash ustuni membranasining o'rtasiga tomizilganligiga ishonch hosil qiling.
5.Buffer PSL2 yoki Buffer PRW2 ga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilmagan.
Taklif: Iltimos, ko'rsatmalarga rioya qiling, PSL2 Buffer va Buffer PRW2 ga to'g'ri miqdorda mutlaq etanol qo'shing va to'plamni ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtiring.
6.To'qima namunasi miqdori mos emas.
Taklif: 500 mkl Bufer PSL1 uchun 50 mg to'qimadan foydalaning.Juda ko'p to'qimalarni ishlatish, olingan RNK miqdorini kamaytiradi va hosil bo'lgan RNKning tozaligi ham kamayadi.Biz namunaning dastlabki dozasi RNK ekstraktsiyasi uchun 50 mg dan oshmasligini qat'iy tavsiya qilamiz.
7.Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq bo'lmagan elyusiya.
Taklif: Tozalash ustunining eluent hajmi 50-200 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH2O qo'shgandan keyin xona haroratida vaqtni uzaytirish tavsiya etiladi, masalan 5-10 min.
8.Tozalash ustunida BufferPRW2 bilan yuvinishdan keyin etanol qoldig'i bor.
Taklif: Agar bo'sh trubka 1 daqiqa davomida santrifüjlangan bo'lsa va PRW2 tamponida yuvilganidan keyin hali ham etanol qolgan bo'lsa, siz bo'sh naychani santrifüj qilish vaqtini 2 daqiqaga oshirishingiz yoki qoldiq etanolni to'liq olib tashlash uchun tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqaga qo'yishingiz mumkin.
9.To'plam noto'g'ri ishlatilgan.
Taklif: Polifenolik polisakkaridlarning o'simlik namunalari uchun o'simlik umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami kabi umumiy to'plamlardan foydalanish ideal RNK namunalarini ololmasligi mumkin.Polifenolik polisakkarid o'simlik namunalari uchun maxsus ishlab chiqilgan Plant Total RNK IsolationKit Plus dan foydalanishni tavsiya qilamiz.Polifenol va polisakkarid o'simlik namunalaridan RNK olish uchun maxsus ishlab chiqilgan to'plam.
OD260/OD280 qiymati past
RNKni ddH2O bilan elutsiya qilish va spektrofotometrni o'qish uchun ishlatiladigan past OD260/OD280 qiymatlariga olib keladi.Nisbatan to'g'ri OD260/OD280 qiymatlarini olish uchun 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (RNKni elutsiya qilish uchun RNase-Free ddH2O o'rniga) foydalanishni tavsiya qilamiz, 19-betdagi “RNK kontsentratsiyasi va tozalash tahlillari”ga qarang.
Tozalangan RNK parchalanadi
Tozalangan RNK sifati namunaning saqlanishi, RNase kontaminatsiyasi va manipulyatsiya kabi omillar bilan bog'liq.
Umumiy sabablarni tahlil qilish:
1.To'qimalar namunalari yig'ilgandan keyin o'z vaqtida saqlanmagan.
Tavsiya: Agar to'qima namunalari yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, iltimos, ularni darhol past haroratda suyuq azotda saqlang yoki suyuq azotda tez muzlatilgandan keyin uzoq muddatli saqlash uchun ularni -80 ° C ga o'tkazing yoki darhol RNK stabilizatorining RNAlater eritmasiga (hayvon namunalari) botiring.RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan to'qimalar namunalaridan foydalanishga harakat qiling.
2.To'qima namunalarini qayta-qayta muzlatish va eritish.
Taklif: To'qimalar namunalarini saqlashda ularni saqlash uchun kichik bo'laklarga bo'lish va namunalarni qayta-qayta muzlatish va eritish natijasida RNK parchalanishiga yo'l qo'ymaslik uchun ulardan foydalanish paytida ulardan bir qismini olib tashlash yaxshidir.
3.RNase operatsiya xonasida kiritiladi yoki bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiyilmaydi.
Taklif: RNK ekstraktsiyasi tajribalari eng yaxshi RNKning alohida operatsiyalarida amalga oshiriladi va laboratoriya stoli tajriba oldidan tozalanishi kerak va RNazning eng ko'p kiritilishi natijasida kelib chiqqan RNK degradatsiyasini oldini olish uchun tajriba davomida bir martalik qo'lqop va niqoblar kiyish kerak.
4.Reagent foydalanish vaqtida RNase bilan ifloslangan.
Taklif: Tegishli tajribalar uchun o'simlik umumiy RNK ekstraksiya to'plamlarining yangi seriyasi bilan almashtiring.
5.RNK bilan manipulyatsiya qilish uchun ishlatiladigan sentrifuga naychalari va pipetka uchlari RNase bilan ifloslangan.
Taklif: RNK ekstraktsiyasida ishlatiladigan sentrifuga naychalari, pipetka uchlari, pipetkalar va boshqalar RNazsiz ekanligiga ishonch hosil qiling.
Yo'riqnomalar:
O'simlikning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami Plus yo'riqnomasi
