Polisaxaridlar va polifenollarda kam o'simliklar uchun o'simliklarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami.
Texnik xususiyatlari
50 ta tayyorgarlik, 200 ta tayyorgarlik
To'plamda Foregene tomonidan ishlab chiqilgan spin ustuni va formulasidan foydalaniladi, u polisaxaridlar va polifenollar miqdori past bo'lgan turli o'simlik to'qimalaridan yuqori toza va yuqori sifatli umumiy RNKni samarali ajratib olishi mumkin.Yuqori polisakkaridlar yoki polifenollar bo'lgan o'simlik namunalari uchun RNK ekstraktsiyasining yaxshi natijalarini olish uchun Plant Total RNK Isolation Plus Kitdan foydalanish tavsiya etiladi.To'plam genomik DNKni supernatant va to'qimalar lizatidan osongina olib tashlaydigan DNK-tozalash ustunini taqdim etadi.Faqat RNK ustuni RNKni samarali bog'lashi mumkin.To'plam bir vaqtning o'zida ko'p sonli namunalarni qayta ishlashga qodir.
Butun tizimda RNase mavjud emas, shuning uchun tozalangan RNK buzilmaydi.Bufer PRW1 va bufer PRW2 olingan RNKning oqsil, DNK, ionlar va organik birikmalar bilan ifloslanmasligini ta'minlaydi.
To'plam komponentlari
| PSL1 buferi, PS buferi, PSL2 buferi |
| PRW1 buferi, PRW2 buferi |
| RNazsiz ddH2O, DNKni tozalash ustuni |
| Faqat RNK ustuni |
| Ko'rsatmalar |
Xususiyatlari va afzalliklari
■ Xona haroratida (15-25 ℃) butun jarayon davomida muzli hammomsiz va past haroratli santrifüjsiz ishlash.
■ RNase-Free to'liq to'plami, RNK degradatsiyasi haqida tashvishlanishga hojat yo'q.
■ DNKni tozalash ustuni DNK bilan maxsus bog'lanadi, shuning uchun to'plam DNase qo'shmasdan genomik DNK ifloslanishini olib tashlashi mumkin.
■ Yuqori RNK rentabelligi: faqat RNK ustuni va noyob formulasi RNKni samarali tozalashi mumkin.
■ Tez tezlik: ishlatish oson va 30 daqiqa ichida bajarilishi mumkin.
■ Xavfsizlik: hech qanday organik reagent talab qilinmaydi.
■ Yuqori sifat: Tozalangan RNK fragmentlari yuqori toza, oqsil va boshqa aralashmalardan xoli va turli quyi oqim eksperimental ilovalariga javob berishi mumkin.
Kit ilovasi
Bu polisakkarid va polifenol miqdori past bo'lgan yangi yoki muzlatilgan o'simlik to'qimalarining namunalaridan (ayniqsa, yangi o'simlik barglari to'qimalari) umumiy RNKni olish va tozalash uchun javob beradi.
Ish oqimi
Diagramma
Plant Total RNK Isolation Kit Plus 50 mg polisaxaridlar va polifenollarning yangi barglarini qayta ishladi va 5% tozalangan RNK elektroforez bilan sinovdan o'tkazildi.
1: banan
2: Ginkgo
3: Paxta
4: Anor
Saqlash va saqlash muddati
To'plam 12 oy davomida xona haroratida (15-25 ℃) quruq muhitda va 2-8 ℃ uzoqroq muddatda (24 oy) saqlanishi mumkin.
PSL1 buferi 2-gidroksi-1-etantiol (ixtiyoriy) qo'shilgandan keyin 1 oy davomida 4 ℃ da saqlanishi mumkin.
Muammoni tahlil qilish bo'yicha qo'llanma
Siz duch kelishi mumkin bo'lgan muammolarning quyidagi tahliliO'simliklar jamiRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Spin ustuni tiqilib qolgan
Spin ustunining bloklanishi RNK hosildorligining pasayishiga yoki hatto RNK olish uchun tozalanmasligiga olib keladi va olingan RNKning sifati past bo'ladi.
Umumiy sabab tahlili:
1. Namuna to'liq buzilmagan.
To'liq bo'lmagan namuna parchalanishi DNK-tozalash ustunini bloklashi mumkin, bu ham RNK hosildorligi va sifatiga ta'sir qilishi mumkin.Namuna parchalanishini amalga oshirayotganda, iloji boricha namunalarning hujayra devorlari va hujayra membranalari kabi to'qimalarni parchalash uchun etarli miqdorda suyuq azotda tezda maydalashni tavsiya qilamiz.Polifenol polisakkaridlarining o'simlik namunalari uchun Plant Total RNK Isolation Kit Plus dan foydalanishni tavsiya qilamiz.
2. DNK-tozalash ustunidan ajratilgan supernatantni aspiratsiya qiling, mumkin bo'lgan hujayra qoldiqlarini aspiratsiya qiling.
Aspiratsiyalangan hujayra qoldiqlari pelleti RNKni adsorbsiyalash protseduralari paytida faqat RNK ustunini yopishi mumkin (protseduraning 5-bosqichiga, polisakkarid polifenol protsedurasining 6-bosqichiga qarang).Hujayra qoldiqlari aspiratsiya qilinmasligi uchun ushbu supernatantni aspiratsiya qilishda ehtiyot bo'lishni tavsiya qilamiz.
3. Namunaning dastlabki miqdori juda katta.
Namunani haddan tashqari ko'p ishlatish namunaning to'liq bo'linmasligiga yoki bufer PRL1 yoki PSL1 buferi tomonidan hujayralarning to'liq lizisiga olib keladi, natijada tozalash operatsiyalari uchun tozalash ustuni tiqilib qoladi.O'simliklarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami operatsiya qilingan namunani bir marta tozalash uchun boshlang'ich maksimal 50 mg ga ega.Polifenol polisakkaridlarining o'simlik namunalari uchun Plant Total RNK Isolation Kit Plus ni sinab ko'rishingizni tavsiya qilamiz.
4. Santrifuganing harorati juda past.
Namuna to'qimalarining suyuq azot buzilishidan tashqari butun RNK izolyatsiyasi va tozalash, barcha bosqichlar xona haroratida (20-25 ° C) amalga oshiriladi.Ba'zi past haroratli sentrifugalarning harorati 20 °C dan past bo'lib, bu DNKni tozalash ustunida va/yoki faqat RNK ustunida tiqilib qolishiga olib kelishi mumkin.Agar bu sodir bo'lsa, santrifüj haroratini 20-25 °C ga qo'ying va liziz aralashmasini va/yoki etanolni ajratish supernatantini qo'shib, 37 °C ga oldindan qizdiring.
Hech qanday RNK olinmaydi yoki RNK rentabelligi past emas
Qayta tiklash samaradorligiga odatda ko'plab omillar ta'sir qiladi, masalan: namunadagi RNK tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.
Quyidagi kabi umumiy sabablarni tahlil qilish:
1.Operatsiya davomida muzli hammom yoki past haroratli (4°C) santrifüjlash amalga oshirildi.
Taklif: butun jarayon davomida xona haroratida (15-25 ° C) ishlang, muzli hammom va past haroratli santrifüj qilmang.
2.RNK namunaning noto'g'ri saqlanishi yoki namunaning uzoq muddatli saqlanishi tufayli buzilgan.
Tavsiya: Yangi yig'ilgan namunalar suyuq azotda tez muzlatilishi va keyin -80 ° C da uzoq vaqt saqlanishi kerak, namunalarni qayta-qayta muzlatish va eritishdan saqlaning;yoki darhol namunalarni RNK stabilizatori RNAlater eritmasiga (hayvon namunalari) soling.
3.Namuna parchalanishi va lizisning etarli emasligi tozalash ustunining bloklanishiga olib keladi.
Taklif: Toʻqimalarni maydalashda toʻqima yetarli darajada maydalanganligiga ishonch hosil qiling va uni tezda oldindan tayyorlangan PSL1 tamponiga oʻtkazing (b-ME ning toʻgʻri nisbati qoʻshilganligini tasdiqlang, protseduraning 1-bosqichiga qarang).
4.Eluent noto'g'ri qo'shilgan.
Taklif: RNase-Free ddH ekanligiga ishonch hosil qiling2O tozalash ustuni membranasining o'rtasiga tomiziladi.
5.Buffer PSL2 yoki Buffer PRW2 ga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilmagan.
Taklif: Iltimos, ko'rsatmalarga rioya qiling, PSL2 Buffer va Buffer PRW2 ga to'g'ri miqdorda mutlaq etanol qo'shing va to'plamni ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtiring.
6.To'qima namunasi miqdori mos emas.
Taklif: 500 mkl Bufer PSL1 uchun 50 mg to'qimadan foydalaning.Juda ko'p to'qimalarni ishlatish, olingan RNK miqdorini kamaytiradi va hosil bo'lgan RNKning tozaligi ham kamayadi.Biz namunaning dastlabki dozasi RNK ekstraktsiyasi uchun 50 mg dan oshmasligini qat'iy tavsiya qilamiz.
7. Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq emas.
Taklif: Tozalash ustunining eluent hajmi 50-200 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH qo'shgandan keyin xona haroratida vaqtni uzaytirish tavsiya etiladi.2O, masalan, 5-10 daqiqa.
8.Tozalash ustunida Buffer PRW2 bilan yuvilgandan keyin etanol qoldiqlari mavjud.
Taklif: Agar bo'sh trubka 1 daqiqa davomida santrifüjlangan bo'lsa va PRW2 tamponida yuvilganidan keyin hali ham etanol qolgan bo'lsa, siz bo'sh naychani santrifüj qilish vaqtini 2 daqiqaga oshirishingiz yoki qoldiq etanolni to'liq olib tashlash uchun tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqaga qo'yishingiz mumkin.
9.To'plam noto'g'ri ishlatilgan.
Taklif: Polifenolik polisakkaridlarning o'simlik namunalari uchun o'simlik umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami kabi umumiy to'plamlardan foydalanish ideal RNK namunalarini ololmasligi mumkin.Polifenolik polisakkarid o'simlik namunalari uchun maxsus ishlab chiqilgan Plant Total RNK IsolationKit Plus dan foydalanishni tavsiya qilamiz.Polifenol va polisakkarid o'simlik namunalaridan RNK olish uchun maxsus ishlab chiqilgan to'plam.
OD260/OD280 qiymati past
RNKni ddH bilan elutsiya qilish2O va spektrofotometr ko'rsatkichlari uchun foydalanilganda past OD260/OD280 qiymatlari paydo bo'ladi.10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (RNase-Free ddH o'rniga) dan foydalanishni tavsiya etamiz.2Nisbatan toʻgʻri OD260/OD280 qiymatlarini olish uchun RNKni elute qilish uchun) 19-betdagi “RNK kontsentratsiyasi va tozalash tahlillari”ga qarang.
Tozalangan RNK parchalanadi
Tozalangan RNK sifati namunaning saqlanishi, RNase kontaminatsiyasi va manipulyatsiya kabi omillar bilan bog'liq.
Umumiy sabablarni tahlil qilish:
1.To'qimalar namunalari yig'ilgandan keyin o'z vaqtida saqlanmagan.
Tavsiya: Agar to'qima namunalari yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, iltimos, ularni darhol past haroratda suyuq azotda saqlang yoki suyuq azotda tez muzlatilgandan keyin uzoq muddatli saqlash uchun ularni -80 ° C ga o'tkazing yoki darhol RNK stabilizatorining RNAlater eritmasiga (hayvon namunalari) botiring.RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan to'qimalar namunalaridan foydalanishga harakat qiling.
2.To'qima namunalarini qayta-qayta muzlatish va eritish.
Taklif: To'qimalar namunalarini saqlashda ularni saqlash uchun kichik bo'laklarga bo'lish va namunalarni qayta-qayta muzlatish va eritish natijasida RNK parchalanishiga yo'l qo'ymaslik uchun ulardan foydalanish paytida ulardan bir qismini olib tashlash yaxshidir.
3.RNase operatsiya xonasida kiritiladi yoki bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiyilmaydi.
Taklif: RNK ekstraktsiyasi tajribalari eng yaxshi RNKning alohida operatsiyalarida amalga oshiriladi va laboratoriya stoli tajriba oldidan tozalanishi kerak va RNazning eng ko'p kiritilishi natijasida kelib chiqqan RNK degradatsiyasini oldini olish uchun tajriba davomida bir martalik qo'lqop va niqoblar kiyish kerak.
4.Reagent foydalanish vaqtida RNase bilan ifloslangan.
Taklif: Tegishli tajribalar uchun o'simlik umumiy RNK ekstraksiya to'plamlarining yangi seriyasi bilan almashtiring.
5.RNK bilan manipulyatsiya qilish uchun ishlatiladigan sentrifuga naychalari va pipetka uchlari RNase bilan ifloslangan.
Taklif: RNK ekstraktsiyasida ishlatiladigan sentrifuga naychalari, pipetka uchlari, pipetkalar va boshqalar RNazsiz ekanligiga ishonch hosil qiling.
Yo'riqnomalar:
O'simlikning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami bo'yicha qo'llanma
