Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
To'plam tavsiflari
2X Real PCR EasyTMReal Time PCR Easy tomonidan taqdim etilgan Mix-TaqmanTM-Taqman to'plami - bu real vaqt rejimida PCR kuchaytirish reaktsiyalari uchun maxsus floresan zondlardan foydalanadigan yangi premiks tizimi bo'lib, mahsulotning o'ziga xosligi va reaktsiya sezgirligini sezilarli darajada yaxshilaydi.ROX ichki nazorat bo'yog'i sifatida taqdim etiladi.
2X haqiqiy PCR osonTMMix-Taqman tarkibida Foregene kompaniyasining noyob hot-start Taq DNK Polimerazasi mavjud.Oddiy Taq fermentlari bilan taqqoslaganda, u yuqori kuchaytirish samaradorligi, kuchli o'ziga xos kuchaytirish qobiliyati va past nomuvofiqlik darajasining afzalliklariga ega.Bu o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirishni kamaytirishi va PCR aniqligini oshirishi mumkin.
Texnik xususiyatlari
Real Time PCR osonTM- Taqmon | ||||
To'plam tarkibi (20ml tizim) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Haqiqiy PCROsonTMAralashtiring- Taqmon | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX mos yozuvlar bo'yog'i | 200 mkl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNazsiz ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Ita'lim | 1 | 1 | 1 | 1 |
Xususiyatlari va afzalliklari
■ Oddiy—eksperimental xato va ish vaqtini kamaytirish uchun 2X PCR aralashmasi
■ Maxsus - optimallashtirilgan bufer va issiq ishga tushirish Taq fermenti o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirish va primer dimer shakllanishining oldini oladi.
■ Yuqori sezuvchanlik — shablonning past nusxalarini aniqlay oladi
■ Yaxshi ko'p qirrali - real vaqt rejimida ko'pgina PCR asboblari bilan mos keladi
Kit ilovasi
qPCR tahlili
Ish oqimi
Grafika
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plam yorug'likdan uzoqda saqlanishi kerak va -20 ℃ haroratda saqlanishi kerak.Tez-tez ishlatilsa, qisqa vaqt (10 kun) uchun 4 ℃ haroratda ham saqlanishi mumkin.
Kuchaytirish signallari yo'q
1.To'plamdagi Taq DNK polimeraza noto'g'ri saqlanishi yoki to'plamning amal qilish muddati tugashi tufayli o'z faoliyatini yo'qotadi.
Tavsiya: to'plamni saqlash shartlarini tasdiqlang;PCR tizimiga tegishli miqdorda Taq DNK polimerazasini qayta qo'shing yoki tegishli tajribalar uchun yangi Real Time PCR to'plamini sotib oling.
2.DNK shablonida Taq DNK polimeraza ingibitorlari ko'p.
Taklif: Shablonni yangilang yoki ishlatiladigan shablon miqdorini kamaytiring.
3.Mg2+ konsentratsiyasi mos emas.
Tavsiya: Biz taqdim etayotgan 2× Real PCR aralashmasining Mg2+ konsentratsiyasi 3,5 mM.Biroq, ba'zi maxsus primerlar va shablonlar uchun Mg2 + kontsentratsiyasi yuqori bo'lishi mumkin.Shuning uchun Mg2+ konsentratsiyasini optimallashtirish uchun to'g'ridan-to'g'ri MgCl2 qo'shishingiz mumkin.Optimallashtirish uchun har safar Mg2+ 0,5 mM ni oshirish tavsiya etiladi.
4. PCR kuchaytirish shartlari mos emas va primer ketma-ketligi yoki konsentratsiyasi noto'g'ri.
Taklif: primer ketma-ketligining to'g'riligini tasdiqlang va primer buzilmagan;agar kuchaytirish signali yaxshi bo'lmasa, tavlanish haroratini pasaytirishga harakat qiling va primer konsentratsiyasini mos ravishda moslashtiring.
5. Shablon miqdori juda oz yoki juda ko'p.
Tavsiya: Shablonni linearizatsiya gradientini suyultirishni amalga oshiring va Real Time PCR tajribasi uchun eng yaxshi PCR effekti bilan shablon konsentratsiyasini tanlang.
NTC juda yuqori floresans qiymatiga ega
1.Ishlash jarayonida yuzaga kelgan reagentning ifloslanishi.
Tavsiya: Real Time PCR tajribalari uchun yangi reagentlar bilan almashtiring.
2.PZR reaktsiya tizimini tayyorlash jarayonida kontaminatsiya sodir bo'ldi.
Tavsiya: Ish paytida zaruriy himoya choralarini ko'ring, masalan: lateks qo'lqop kiyish, filtrli pipetka uchidan foydalanish va hokazo.
3. Primerlar buziladi va primerlarning degradatsiyasi o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirilishiga olib keladi.
Taklif: SDS-PAGE elektroforezidan foydalanib, primerlar degradatsiyaga uchragan yoki yo'qligini aniqlang va ularni Real Time PCR tajribalari uchun yangi primerlar bilan almashtiring.
Primer dimer yoki o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirish
1.Mg2+ konsentratsiyasi mos emas.
Tavsiya: Biz taqdim etayotgan 2× Real PCR EasyTM Mixning Mg2+ konsentratsiyasi 3,5 mM.Biroq, ba'zi maxsus primerlar va shablonlar uchun Mg2 + kontsentratsiyasi yuqori bo'lishi mumkin.Shuning uchun Mg2+ konsentratsiyasini optimallashtirish uchun to'g'ridan-to'g'ri MgCl2 qo'shishingiz mumkin.Optimallashtirish uchun har safar Mg2+ 0,5 mM ni oshirish tavsiya etiladi.
2. PCR tavlanish harorati juda past.
Taklif: PCR tavlanish haroratini har safar 1 ℃ yoki 2 ℃ ga oshiring.
3. PCR mahsuloti juda uzun.
Tavsiya: Real Time PCR mahsulotining uzunligi 100-150bp orasida, 500bp dan oshmasligi kerak.
4. Primerlar buziladi va primerlarning degradatsiyasi o'ziga xos kuchaytirishning paydo bo'lishiga olib keladi.
Taklif: SDS-PAGE elektroforezidan foydalanib, primerlar degradatsiyaga uchragan yoki yo'qligini aniqlang va ularni Real Time PCR tajribalari uchun yangi primerlar bilan almashtiring.
5. PCR tizimi noto'g'ri yoki tizim juda kichik.
Taklif: PCR reaktsiya tizimi juda kichik bo'lsa, aniqlash aniqligi pasayadi.Real Time PCR tajribasini qayta o'tkazish uchun miqdoriy PCR asbobi tomonidan tavsiya etilgan reaktsiya tizimidan foydalanish yaxshidir.
Miqdoriy qiymatlarning yomon takrorlanishi
1. Asbob noto'g'ri ishlayapti.
Taklif: Asbobning har bir PCR teshigi o'rtasida xatolar bo'lishi mumkin, bu esa haroratni boshqarish yoki aniqlashda yomon takrorlanishga olib keladi.Iltimos, tegishli asbobning ko'rsatmalariga muvofiq tekshiring.
2.Namunaning tozaligi yaxshi emas.
Tavsiya: Nopok namunalar shablon va primerlarning tozaligini o'z ichiga olgan tajribaning yomon takrorlanishiga olib keladi.Shablonni qayta tozalash eng yaxshisidir va primerlar SDS-PAGE orqali eng yaxshi tozalanadi.
3. PCR tizimini tayyorlash va saqlash muddati juda uzoq.
Taklif: Tayyorgarlikdan so'ng darhol PCR tajribasi uchun Real Time PCR tizimidan foydalaning va uni uzoq vaqt davomida chetga surib qo'ymang.
4. PCR kuchaytirish shartlari mos emas va primer ketma-ketligi yoki konsentratsiyasi noto'g'ri.
Taklif: primer ketma-ketligining to'g'riligini tasdiqlang va primer buzilmagan;agar kuchaytirish signali yaxshi bo'lmasa, tavlanish haroratini pasaytirishga harakat qiling va primer konsentratsiyasini mos ravishda moslashtiring.
5. PCR tizimi noto'g'ri yoki tizim juda kichik.
Taklif: PCR reaktsiya tizimi juda kichik bo'lsa, aniqlash aniqligi pasayadi.Real Time PCR tajribasini qayta o'tkazish uchun miqdoriy PCR asbobi tomonidan tavsiya etilgan reaktsiya tizimidan foydalanish yaxshidir.