Virusli DNK va RNK izolyatsiyasi to'plami Virusli DNK va RNK ekstraktsiyasini tozalash uchun tayyorlash to'plamlari
Texnik xususiyatlari
50 ta tayyorgarlik, 200 ta tayyorgarlik
Virusli RNK nuklein kislotasini tozalash ekstrakti izolyatsiyasi to'plami Foregene tomonidan ishlab chiqilgan spin ustuni va formulasidan foydalanadi, bu plazma, sarum, hujayrasiz tana suyuqligi va hujayra madaniyati supernatanti kabi namunalardan yuqori toza va yuqori sifatli virusli RNKni samarali ravishda ajratib olishi mumkin.To'plam maxsus Lineer Akrilamidni qo'shadi, u namunalardan oz miqdordagi RNKni osongina ushlay oladi.Faqat RNK ustuni RNKni samarali bog'lashi mumkin.To'plam bir vaqtning o'zida ko'p sonli namunalarni qayta ishlashga qodir.
Butun to'plamda RNase mavjud emas, shuning uchun tozalangan RNK buzilmaydi.Bufer viRW1 va bufer viRW2 olingan virusli nuklein kislotada oqsil, nukleaz yoki boshqa aralashmalar bo'lmasligini ta'minlashi mumkin, ular bevosita quyi oqim molekulyar biologiya tajribalari uchun ishlatilishi mumkin.
To'plam komponentlari
| Chiziqli akrilamid |
| Bufer DRL |
| Bufer RW1, bufer RW2 |
| RNazsiz ddH2O |
| DNK/RNK ustuni |
| Ko'rsatmalar |
Xususiyatlari va afzalliklari
■ Xona haroratida (15-25 ℃) butun jarayon davomida muzli hammomsiz va past haroratli santrifüjsiz ishlash.
■ RNase-Free to'liq to'plami, RNK degradatsiyasi haqida tashvishlanishga hojat yo'q.
■ Nuklein kislotaning yuqori chiqishi: faqat DNK/RNK ustuni va noyob formulasi DNK va RNKni samarali tozalashi mumkin.
■ Katta namunani qayta ishlash hajmi: har safar 200 mkl gacha namunalar qayta ishlanishi mumkin.
■ Tez tezlik: ishlatish oson va 20 daqiqa ichida bajarilishi mumkin.
■ Xavfsizlik: hech qanday organik reagent talab qilinmaydi.
■ Yuqori sifat: Tozalangan RNK fragmentlari yuqori toza, oqsil va boshqa aralashmalardan xoli va turli quyi oqim eksperimental ilovalariga javob berishi mumkin.
Kit ilovasi
Plazma, sarum, hujayrasiz tana suyuqligi va hujayra madaniyati supernatanti kabi namunalarda virusli nuklein kislotani olish va tozalash uchun javob beradi.
Ish oqimi
Diagramma
Saqlash va saqlash muddati
■ Ushbu to'plam quruq sharoitda xona haroratida (15-25 ℃) 24 oy davomida saqlanishi mumkin;Agar uni uzoqroq saqlash kerak bo'lsa, uni 2-8 ℃ haroratda saqlash mumkin.
■ Lineer Akrilamid eritmasi xona haroratida 7 kun davomida saqlanishi mumkin;to'plamni olganingizdan so'ng, uni olib tashlang va -20 ° C haroratda saqlang.
■ Bufer DRL ga Lineer Akrilamid qo'shgandan so'ng, uni 2-8°C haroratda 48 soatgacha saqlash mumkin.Iltimos, tayyor yechimdan foydalaning.
Muammoni tahlil qilish bo'yicha qo'llanma
Quyida virusli DNK/RNKni olishda yuzaga kelishi mumkin bo'lgan muammolar tahlili keltirilgan bo'lib, u sizning tajribalaringizga yordam beradi.Bundan tashqari, foydalanish bo'yicha ko'rsatmalar va muammolarni tahlil qilishdan tashqari boshqa eksperimental yoki texnik muammolar uchun biz sizga yordam berish uchun maxsus texnik yordam beramiz.Agar biron bir ehtiyojingiz bo'lsa, biz bilan bog'laning: 028-83360257 yoki E-mail:
Tech@foregene.com.
Nuklein kislotasi ekstraktsiyasi yo'q yoki nuklein kislotaning past chiqishi
Qayta tiklash samaradorligiga odatda ko'plab omillar ta'sir qiladi, masalan: nuklein kislotasi namunasi tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.
Umumiy sabablarni tahlil qilish:
1. Jarayon davomida muzli hammom yoki past haroratli (4 ° C) santrifüjlash amalga oshirildi.
Taklif: Butun jarayon davomida xona haroratida (15-25°C) ishlang, muzli hammom va past haroratli santrifüj qilmang.
2. Namuna noto'g'ri saqlangan yoki namuna juda uzoq vaqt davomida saqlangan.
Tavsiya: Namunalarni -80°C da saqlang va takroriy muzlatish va eritishdan saqlaning;nuklein kislotasini olish uchun yangi yig'ilgan namunalardan foydalanishga harakat qiling.
3. Namuna lizisining etarli emasligi.
Tavsiya: Iltimos, namuna va liziz uchun ishlaydigan eritma yaxshilab aralashtirilganligiga ishonch hosil qiling va xona haroratida (15-25°C) 10 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
4. Eluentning noto'g'ri qo'shilishi.
Taklif: RNase-Free ddH2O tozalash ustuni membranasining o'rtasiga tomchilab qo'shilganligiga ishonch hosil qiling va uni tozalash ustuni halqasiga tushirmang.
5. RW2 tamponiga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilmagan.
Taklif: Iltimos, ko'rsatmalarga rioya qiling, bufer RW2 ga to'g'ri miqdorda mutlaq etanol qo'shing va to'plamni ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtiring.
6. Noto'g'ri namuna hajmi.
Taklif: Bufer DRL ning har 500 µl uchun 200 µl namuna qayta ishlanadi.Namunalarni haddan tashqari ko'p qayta ishlash nuklein kislotasi ekstraktsiyasining pasayishiga olib keladi.
7. Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq emas.
Tavsiya: Tozalash ustunining eluent hajmi 30-50 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH2O qo'shgandan keyin xona haroratida vaqtni uzaytirish tavsiya etiladi, masalan 5-10 min.
8. Buffer RW2 bilan yuvilgandan keyin kolonnada etanol qoladi.
Taklif: Bufer RW2 bilan 2 daqiqa davomida santrifüjdan keyin etanol qolsa, qoldiq etanolni to'liq olib tashlash uchun kolonka santrifüjdan keyin 5 daqiqa davomida xona haroratida joylashtirilishi mumkin.
Tozalangan nuklein kislota parchalanadi
Tozalangan nuklein kislotaning sifati namunaning saqlanishi, RNazning ifloslanishi, ishlashi va boshqa omillar bilan bog'liq.Umumiy sabablarni tahlil qilish:
1. Yig'ilgan namunalar o'z vaqtida saqlanmagan.
Taklif: Agar namuna yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, iltimos, uni darhol past haroratda -80 ° C da saqlang.RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan namunalardan foydalanishga harakat qiling.
2. Namunalarni yig'ing va qayta-qayta muzlatib, eritib yuboring.
Taklif: Namunalarni yig'ish va saqlash vaqtida muzlatish va eritishdan (bir martadan ko'p bo'lmagan) saqlaning, aks holda nuklein kislotasi hosili kamayadi.
3. Operatsiya xonasida RNase kiritiladi yoki bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiyilmaydi.
Tavsiya: RNK ekstraktsiyasi bo'yicha tajribalar eng yaxshisi alohida RNK operatsiya xonasida amalga oshiriladi va laboratoriya stolini tajribadan oldin tozalash kerak.
Tajriba davomida RNazning kiritilishi natijasida yuzaga keladigan RNK degradatsiyasiga yo'l qo'ymaslik uchun bir martalik qo'lqop va niqob kiying.
4. Foydalanish vaqtida reagent RNase bilan ifloslangan.
Tavsiya: Tegishli tajribalar uchun yangi Virusli DNK/RNK izolyatsiyasi to'plami bilan almashtiring.
5. RNK manipulyatsiyasi uchun ishlatiladigan sentrifuga naychalari va pipetka uchlari RNase bilan ifloslangan.
Taklif: RNK ekstraktsiyasi uchun ishlatiladigan santrifüj naychalari, pipetka uchlari, pipetkalar va boshqalar RNazsiz ekanligiga ishonch hosil qiling.
Tozalangan nuklein kislota quyi oqim tajribalariga ta'sir qiladi
Tozalash ustuni bilan tozalangan DNK va RNK, agar tuz ioni va oqsil miqdori juda yuqori bo'lsa, u quyi oqim tajribalariga ta'sir qiladi, masalan: PCR kuchaytirilishi, teskari transkripsiya va boshqalar.
1. Elutsiya qilingan DNK va RNK qoldiq tuz ionlariga ega.
Taklif: RW2 tamponiga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilganligiga ishonch hosil qiling va tozalash ustunini ishlatish yo'riqnomasida ko'rsatilgan santrifüj tezligida ikki marta yuving;Tuz ionining ifloslanishini minimallashtirish uchun santrifüjni bajaring.
2. Elutsiya qilingan DNK va RNKda etanol qoldiqlari mavjud.
Taklif: Buffer RW2 bilan yuvishni tasdiqlaganingizdan so'ng, foydalanish yo'riqnomasida santrifüj tezligida bo'sh trubkani santrifüj qilishni bajaring;agar hali ham etanol qoldig'i mavjud bo'lsa, siz bo'sh trubkani santrifüj qilishingiz va keyin etanol qoldig'ini maksimal darajada olib tashlash uchun uni xona haroratida 5 daqiqaga qo'yishingiz mumkin.
Yo'riqnomalar:
Virusli DNK va RNK izolyatsiyasi to'plami bo'yicha qo'llanma
