Kirish:

RNK, ilmiy nomi ribonuklein kislotasi, uning qisqartmasi Ribonuklein kislotasidan kelib chiqqan bo'lib, kamida o'nlab ribonukleotidlarni fosfodiester bog'lari orqali bog'lash natijasida hosil bo'lgan nuklein kislotaning bir turi.

RNKni o'rganishning asosi ifloslanmagan umumiy RNKni ajratib olishdir va RNK ekstraktsiyasining asosiy printsipini taxminan quyidagicha umumlashtirish mumkin:

1. Avval hujayralarni buzing

2. Keyin makromolekulyar aralashmalarni (oqsillar, lipidlar, DNK va boshqalar) olib tashlang.

3. Nihoyat, tuzlar va organik erituvchilarni olib tashlash va RNKni yanada tozalash jarayonida RNK cho'kadi.

Ekstraksiya usulining o'tmishi va hozirgi kuni

RNK olish usulining birinchi avlodi Piotr Chomchinski ismli bobo va buvisi Nikoletta Sakki tomonidan ixtiro qilingan TRIzol cho'ktirish usulidir (ishlatiladigan reagentlar guanidin izotiosiyanat, fenol, xloroform va boshqalar), chunki bu ixtiro RNKni tez va oson ajratib olish imkonini beradi.

Keyinchalik, bobo bu patentni Invitrogenga sotdi va Invitrogen bu usulni dunyoga targ'ib qildi va keng tarqalgan usulga aylandi.

Keyinchalik, Invitrogen Thermo tomonidan sotib olindi!

Vakillik mahsuloti: Invitrogenning TRIzol reaktivi

Biroq, TRIzolni cho'ktirish usuli ko'p marta yog'ingarchilik va RNKning ekstraktsiyasini talab qiladi va ishlatiladigan reagentlar zaharli va uzoq vaqt ishlaydi.

Shu sababli, boshqa aralashmalarni olib tashlash bilan birga namunadagi RNKning tiklanishini maksimal darajada oshirish uchun maxsus nuklein kislota adsorbsion material sifatida silika jel membranasidan foydalangan holda ikkinchi avlod ustunli fermentlarni tozalash usuli paydo bo'ldi.

Ikkinchi avlod usuli barqaror ishlash asosida operatsiyani soddalashtiradi, xavf omilini kamaytiradi va RNK ekstraktsiyasining samaradorligini oshiradi.

Vakillik mahsulotlari: QIAGEN RNeasy va ko'pchilik mahalliy mahsulotlar

Biroq, birinchi va ikkinchi avlod usullari DNK ifloslanishini olib tashlash uchun DNase dan foydalanishni talab qiladi, bu esa keyingi quyi oqim tajribalariga ba'zi noqulayliklar keltiradi.Qoldiq DNase teskari transkripsiya samaradorligini pasaytiradi va birinchi zanjirli cDNK sintezini kamaytiradi, bu esa natijalarning aniqligiga ta'sir qiladi.

Shuning uchun uchinchi avlod ekstraktsiya usuli ikkinchi avlod asosida optimallashtirilgan.Tajribaga hech qanday ferment qo'shish shart emas va RNKni faqat ikkita ustun bilan osongina olish mumkin.

1-ustun: DNKni tozalash uchun DNK-tozalash ustuni

2-ustun: faqat RNK ustuni RNKni maxsus adsorbsiyalaydi va tiklaydi

Bunday oddiy operatsiya nafaqat vaqtni tejaydi, balki quyi oqim eksperimentlarining ishlashini ham osonlashtiradi!

Vakillik mahsulotlari: QIAGEN RNeasy Plus vaForegeneRNKni tozalash seriyali mahsulotlar

(RNeasy Plus)

（Foregene ningO'simlik umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami）

Jimgina ayting!Foregene RNK to'plami, shuningdek, ishlatish uchun juda oson RNase Eraserni taqdim etadi, u 1 daqiqada qattiq sirtdagi 400 mkg RNazni inson tanasiga hech qanday zaharli moddalar qo'shmasdan butunlay olib tashlashi mumkin!

Rasm1: Operatsion jarayonlarni taqqoslash jadvali

Foregene mahsulotlari RNK ekstraktsiyasini faqat ikkita qo'shiqda yakunlashi mumkin, boshqalarni tajribangiz muvaffaqiyatiga hasad qilmang!

Rasm2:Eeksperimental natijalar taqqoslash jadvali

Birinchi avlod (1: TRIzol)

Ikkinchi avlod (2: QIAGENning RNeasy)

Uchinchi avlod (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Rasm3: qPCR grafigi (kuchaytirish egri grafigi)

Birinchi avlod (yashil rang TRIzol -, qizil TRIzol + degan ma'noni anglatadi)

Ikkinchi avlod (ko'k rang QIAGEN RNeasy-, qizil rang QIAGEN RNeasy + degan ma'noni anglatadi)

Uchinchi avlod (ko'k QIAGEN RNeasy plus, yashil rang Foregene degan ma'noni anglatadi)

(Eslatma: qPCR grafigi "-" DNase qo'shilmaganligini va DNK ifloslanishi olib tashlanmaganligini ko'rsatadi. Shuning uchun KT yuqoriroq va natija aniq emas; "+" DNase qo'shilganligini va DNK ifloslanishi olib tashlanganligini ko'rsatadi, natija aniq)

Har bir texnik yangilanish eksperimentning ishlashi soddaroq va foydalanuvchilarga qulayroq yo'nalishda rivojlanayotganini anglatadi.

Foregene ko'proq ilmiy tadqiqotchilarga eksperimental vaqt va xarajatlarni tejash, yuqori sifatli eksperimental natijalarni olish va birgalikda yanada qimmatli ilmiy tadqiqot yutuqlarini yaratishga yordam berishni maqsad qilgan.