Mualliflar: Vang Xiaoyan, Chjao Eryu

Bo'lim: Jiaozhou kasalxonasi, Tongji universitetiga qarashli Dongfang kasalxonasi

Hozirgi vaqtda nafas olish yo'llarining patogenini aniqlash uchun nuklein kislotaning asosiy namunasi - bu tomoq tayoqchasi.Ko'p ishlatiladigan namunalarni saqlash yechimlarining ko'p turlari mavjud bo'lib, ularning barchasini tashish va saqlash uchun muzlatish yoki muzlatish kerak;Yig'ish va tashish jarayonida past haroratning butun jarayonini nazorat qilish qiyin va namuna sinovidan oldin sifat nazoratini ta'minlash qiyin.^[1-2].

RNase (RNase) - bu RNKni gidrolizlovchi, asosan nukleotidlar orasidagi fosfodiester bog'lanishlarini buzadigan endonukleaza.RNase molekulasi juda barqaror, strukturasida disulfid bog'lari mavjud va uning faolligi ikki valentli kationlarning mavjudligini talab qilmaydi, shuning uchun RNase osonlikcha denatüratsiyalanmaydi va yuqori harorat yoki denaturantlardan foydalangandan keyin ham renaturatsiya qilish oson.RNazalar endogen va ekzogenlarga bo'linadi.Endogen RNazalar hujayralar yorilishi bilan bir vaqtda chiqarilishi mumkin.Shuning uchun endogen RNazalarning rolini yo'q qilish RNK ​​ekstraktsiyasi jarayonida juda muhim qadamdir.Ekzogen RNazalar keng tarqalgan.RNazlar havoda, inson terisida, sochlarida va tupuriklarida mavjud bo'lib, ular RNKning oson parchalanishining muhim sabablari hisoblanadi.^[3].

Ma'lumotlar so'rovi

CANS-CL02-A009 "Molekulyar diagnostika sohasida tibbiy laboratoriya sifati va malakasini akkreditatsiya qilish bo'yicha yo'riqnomalarni qo'llash" texnik talablarida tegishli suv sifati standartlari ilovaga muvofiq shakllantirilishini taklif qiladi;Bir martalik havo o'tkazmaydigan idishlar:

RNase/Tasnifi

(1) RNase A

Ribonukleaza A (RNase A), sigir oshqozon osti bezidan olingan, bu endoribonukleaza bo'lib, u RNKdagi pirimidin qoldiqlarining 3' uchiga, qo'shni nukleotidlar tomonidan hosil bo'lgan sitozinni yoki urasilni kesib tashlashi mumkin.Fosfodiester aloqasi, reaksiyaning yakuniy mahsuloti 3′ pirimidin nukleotid va oxirida 3′ pirimidin nukleotidli oligonukleotiddir.

(2) RNase T1

Ribonukleaza T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae dan olingan bo'lib, u maxsus guaninning 3'-terminal fosfatiga ta'sir qiladi va parchalanish joyi guaninning 3' fosfati va qo'shni nukleotidlarning 5' gidroksillari orasida joylashgan.Reaksiyaning yakuniy mahsuloti 3′guanil kislotasi va oxirida 3′guanil kislotasi boʻlgan oligonükleotid boʻlaklaridir.

(3) RNase H

Ribonukleaza H (RNase H) birinchi bo'lib buzoq timus to'qimasidan topilgan va uning kodlash geni Escherichia coli ga klonlangan.U DNKni maxsus ravishda parchalashi mumkin: RNK gibrid duplekslaridagi RNK zanjirlari, natijada 3'-OH va 5'-monofosfat uchlari bo'lgan oligonükleotidlar va mononukleotidlar paydo bo'ladi, u bir yoki ikki zanjirli DNK yoki RNKni parchalay olmaydi.

RNase

Funktsiya va foydalanish

Ribonukleaza ribonuklein kislotaning (RNK) parchalanishini katalizlashi va sun'iy ravishda sintezlanishi mumkin.Tibbiy malham travma va qo'shma og'riqlarni davolash uchun topikal ravishda qo'llaniladi.Hisobotlarga ko'ra, ribonukleaza mezbon hujayra metabolizmini o'zgartirishi, virus sintezini inhibe qilishi, in vitro gripp virusining ko'payishini inhibe qilishi va tovuq embrionlarida vaksin va herpes virusining shakllanishiga to'sqinlik qilishi mumkin.Epidemik ensefalitni davolashda foydali bo'lgan ribonukleaza kundalik mushak ichiga 180 mg dan klinik foydalanish, ribonukleaza ribonuklein kislotasining (RNK) degradatsiyasini katalizlashi mumkin va endi sun'iy ravishda sintezlanishi mumkin.Tibbiy malham travma va qo'shma og'riqlarni davolash uchun topikal ravishda qo'llaniladi.Hisobotlarga ko'ra, ribonukleaza mezbon hujayra metabolizmini o'zgartirishi, virus sintezini inhibe qilishi, in vitro gripp virusining ko'payishini inhibe qilishi va tovuq embrionlarida vaksin va herpes virusining shakllanishiga to'sqinlik qilishi mumkin.Epidemik ensefalitni davolash uchun kuniga 180 mg mushak ichiga ribonukleazni klinik qo'llash foydalidir.

RNase

Inhibitor ta'rifi

RNase inhibitör birligining ta'rifi: 5ng RNase A faolligining 50% ni inhibe qilish uchun zarur bo'lgan ferment miqdori bir birlikdir.

RNaz inhibitörleri qanday ishlaydi

Guanidin izotiosiyanat:

Guanidin izotiosiyanat - C2H6N4S molekulyar formulali organik birikma.Asosan biologik tibbiyotda, kimyoviy reagentlarda va boshqalarda qo'llaniladi. Guanidin izotiyosiyanat oqsil lizing agenti bo'lib, u ko'pincha molekulyar diagnostika reagentlarida lizis eritmasining asosiy komponenti sifatida ishlatiladi.U to'qimalarni parchalashi, hujayra tuzilishini yo'q qilishi va nuklein kislotani nukleoproteindan ajratishi mumkin va RNazga kuchli denatürasyona ega.Bu hozirgi vaqtda eng samarali RNase inhibitori.

TRIzol - bu umumiy RNKni to'g'ridan-to'g'ri hujayralar yoki to'qimalardan ajratib oladigan yangi umumiy RNK ekstraktsiya reagenti.Uning tarkibida fenol va guanidin izotiyosiyanat kabi moddalar mavjud bo'lib, ular hujayralarni tezda buzishi va hujayralar tomonidan chiqarilgan nukleazlarni inhibe qilishi mumkin.

(Biroq, guanidin izotiosiyanat laboratoriya tadqiqotchilari salomatligi uchun xavflidir.)

RNasin:

Sichqon jigaridan yoki inson blastodermasidan olingan kislota glikoprotein.Rnasin RNase ning raqobatbardosh bo'lmagan inhibitori bo'lib, u turli RNazalarni faolsizlantirish uchun bog'lashi mumkin.

(Batafsil: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hyuqori harorat:

Yuqori harorat, shuningdek, oqsil denaturatsiyasining keng tarqalgan vositasidir.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC kuchli, ammo to'liq bo'lmagan RNase inhibitori bo'lib, RNase faol guruhining aminokislota imidazol halqasi bilan oqsillarni denatüratsiya qilish orqali RNase faolligini inhibe qilishi mumkin.

Vanadil ribonukleozid kompleksi:

Vanadiy oksidi ionlari va nukleozidlar tomonidan hosil bo'lgan, RNase bilan o'tish moddalari shaklida bog'langan, RNase faolligini deyarli to'liq inhibe qila oladigan kompleks.

boshqa:

SDS, karbamid, diatomli tuproq va boshqalar ham RNazga ma'lum bir inhibitiv ta'sir ko'rsatadi.

Ekspert sharhlari

Li Yujie bosh texnik

Tongji universitetiga qarashli Dongfang kasalxonasi Jiaozjou kasalxonasi laboratoriya bo'limi direktori

Ekzogen RNase biodegradatsiyasini oldini olish uchun RNK ekstraktsiyasi jarayonida niqoblar, qo'lqoplar va bosh kiyimlarni tez-tez kiyish va almashtirish kerak.Barcha shisha idishlar quritadigan pechda 200 ° C haroratda 2 soatdan ko'proq vaqt davomida pishirilishi kerak.Pishirish uchun ishlatiladigan materiallar, masalan, plastmassa, DEPC suvi bilan ishlov berilishi va keyin distillangan suv bilan yuvilishi kerak.RNKni ekstraktsiya qilish, saqlash va identifikatsiya qilish uchun ishlatiladigan reagentlar yoki qurilmalar RNKga bag'ishlangan bo'lishi kerak va mustaqil RNK operatsiya maydoni tashkil etilishi kerak.

havolalar:

[1] Smit-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J va boshqalar.Mahalliy Avstraliya bolalarida o'tkir pastki nafas yo'llarining infektsiyalari boshlanishidan oldin nazofarenkdagi bakteriyalar va viruslar [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Xitoy profilaktika tibbiyoti assotsiatsiyasining kasalxonada infektsiyani nazorat qilish bo'limi.Klinik mikrob namunalarini yig'ish va tekshirish bo'yicha ko'rsatmalar [J].Xitoy kasalxona infektsiyalari jurnali, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Klinik test o'n ming nima uchun molekulyar biologiya test hajmi"