Quyidagi mumkin bo'lgan muammolarni tahlil qilishBukkaltampon/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Tozalash ustuni tiqilib qolgan

Ushbu to'plamda genomik DNK ekstraktsiyasi operatsiyasida tozalash ustuni to'g'ridan-to'g'ri namunaning fermentativ lizis aralashmasiga santrifüjlash bosqichisiz adsorbsiyalanadi va tozalash ustuni to'liq fermentizatsiya qilinmaganligi va namunaning yuqori viskozitesi tufayli bloklanishi mumkin.

Quyidagi mumkin bo'lgan sabablar:

1. To'qimalar namunalarining to'liq bo'lmagan fermentativ hazm bo'lishi.

Tavsiya: Foregene Protease namunasini qayta ishlash muddati mos ravishda uzaytirilishi yoki supernatantni 12 000 rpm (~ 13 400) da santrifüjdan keyin olish mumkin.× g) 5 min.

2. To'qimalar namunalaridan yoki katta to'qimalardan ortiqcha foydalanish.

Tavsiya: 1 dan oshmagan ma'qulBukkal namunadagi tampon;agar namuna juda katta bo'lsa, ST1 Buffer, Foregene Protease, ST2 buferining dozasini mos ravishda oshiring.

3. Namuna viskozitesi juda yuqori.

Tavsiya: Genomik DNK ekstraktsiyasidan oldin namunalar 10 mM Tris-HCl bilan mos ravishda suyultirilishi mumkin.

4. Qon kartasining bo'laklari so'rilgan.

Tavsiya: Qon dog'ini (FTA Card) genomik ekstraktsiyasining 6-bosqichining vaqtinchalik santrifüj vaqti tegishli ravishda uzaytirilishi mumkin.

Past rentabellik yoki DNK yo'qligi

Ko'pincha genomik DNK hosildorligiga ta'sir qiluvchi turli omillar mavjud, jumladan, namunaning kelib chiqishi, namunani saqlash shartlari, namunani tayyorlash, manipulyatsiya va boshqalar.

Ekstraksiya paytida genomik DNKni olish mumkin emas

Mumkin bo'lgan sabablar quyidagilar:

1. Namunalarni noto'g'ri saqlash yoki juda uzoq vaqt saqlash genomik DNK degradatsiyasiga olib keladi.

Tavsiya: Og'iz bo'shlig'i tamponlaridan yangi namuna olish kerak va genomik DNK ekstraktsiyasi uchun konservalangan tamponlardan foydalanish tavsiya etilmaydi;qon dog'lari namunalari sifatning malakali bo'lishini ta'minlashi va saqlash muddati juda uzoq bo'lmasligi kerak.

2. To'qimalardan juda kam foydalanish mos keladigan genomik DNKning ekstraktsiyasiga olib kelishi mumkin.

Tavsiya: ga amal qilingbukkal operatsiya yo'riqnomasida tampondan namuna olish yo'riqnomasini yozing va genomik DNK ekstraktsiyasi uchun og'iz bo'shlig'iga etarlicha hujayralar biriktirilishi uchun imkon qadar ko'p marta artib oling;qon dog'i namunasini olish uchun qon dog'ini kesish maydoni mos ravishda oshirilishi mumkin.

3. Foregene Proteaz noto'g'ri saqlanadi, natijada uning faolligi yoki inaktivatsiyasi kamayadi.

Tavsiya: saqlash shartlarini tasdiqlangForegene Proteaz yoki uni fermentativ reaksiya uchun yangi Foregene Proteaz bilan almashtiring.

4. To'plamning noto'g'ri saqlanishi yoki saqlash muddati juda uzoq, natijada to'plamdagi ba'zi komponentlar ishdan chiqadi.

Tavsiya: yangisini sotib olingBukkal tampon DNKizolyatsiya tegishli protseduralar uchun to'plam.

5. Bufer WB mutlaq etanolni qo'shmaydi.

Tavsiya: Bufer WB mutlaq etanolning to'g'ri hajmini qo'shishini tasdiqlang.

6. Silikon plyonkaga eluent to'g'ri qo'shilmagan.

Tavsiya: 65 qo'shing°Coldindan qizdirilgan eluent silikon membrananing o'rtasiga tushadi va elutsiya samaradorligini oshirish uchun xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.

Lhosildor genomik DNK izolyatsiya qilingan

Quyidagi mumkin bo'lgan sabablar:

1. Namunalarni noto'g'ri saqlash yoki juda uzoq vaqt saqlash genomik DNK degradatsiyasiga olib keladi.

Tavsiya: Og'iz bo'shlig'idan olingan tamponlar yangi namuna olingan va konservalangan tamponlardan genomik DNK ekstraktsiyasi uchun foydalanilmasligi kerak.

2. Agar to'qima namunasi miqdori juda kichik bo'lsa, olingan genomik DNK tarkibi kamroq bo'ladi.

Tavsiya: Genomik DNK ekstraktsiyasi uchun og'iz bo'shlig'iga yetarlicha hujayralar biriktirilishi uchun imkon qadar ko'p marta artib, operatsiya yo'riqnomasidagi og'iz tamponlaridan namuna olish ko'rsatmalariga amal qiling.

3. Foregene Proteaz noto'g'ri saqlanadi, natijada uning faolligi yoki inaktivatsiyasi kamayadi.

Tavsiya: saqlash shartlarini tasdiqlangthe Foregen Proteaz yoki uni yangisi bilan almashtiring Enzimatik reaktsiya uchun Foregene Proteaz.

4. Eluent masalalari.

Tavsiya: Elyusiya uchun Buffer EB dan foydalaning;agar ddH dan foydalansangiz₂O yoki boshqa eluentlar, elyuatning pH qiymati 7,0-8,5 orasida ekanligini tasdiqlang.

5. Eluat tomchilab to'g'ri qo'shilmagan.

Tavsiya: Silikon membrananing o'rtasiga eluent tomchilarini qo'shing va tozalash samaradorligini oshirish uchun xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.

6. Elutsiya suyuqligi juda kam to'planadi.

Tavsiya: hech bo'lmaganda ko'rsatmalarda talab qilinganidek, genomik DNKni elutsiya qilish uchun elyuentdan foydalaningkam emas 15 dan ortiqμl.

Loh poklik of genomik DNKizolyatsiya qilingan

Past genomik DNK sofligi quyi oqimdagi tajribalarning muvaffaqiyatsizligi yoki qoniqarsiz natijalariga olib kelishi mumkin, masalan: fermentlarni kesib bo'lmaydi, PCR qiziqtiradigan gen fragmentini ololmaydi va hokazo.

Mumkin bo'lgan sabablar quyidagilar:

1. Geteroproteinlarning ifloslanishi, RNKning ifloslanishi.

Tahlil: tozalash ustuni Buffer PW yordamida yuvilmagan;Buffer PW yuvish tozalash ustuni to'g'ri markazdan qochma tezligi yordamida yuvilmagan.

Tavsiya: Etanol qo'shishdan oldin supernatantda yog'ingarchilik yo'qligiga ishonch hosil qiling;tozalash ustunini ko'rsatmalarga muvofiq yuvishingizga ishonch hosil qiling va bu bosqichni o'tkazib yuborish mumkin emas.

2. Nopoklik ionlari bilan ifloslanishi.

Tahlil: Bufer WB yuvish tozalash ustuni o'tkazib yuborildi yoki faqat bir marta yuvildi, natijada qoldiq ionli ifloslanish paydo bo'ldi.

Tavsiya: Qolgan ionlarni iloji boricha olib tashlash uchun Buffer WB ni ko'rsatilgandek 2 marta yuvishni unutmang.

3. RNK fermenti bilan ifloslanish.

Tahlil: Xorijiy RNases buferga qo'shildi;Bufer PW yuvish operatsiyasi noto'g'ri edi, natijada RNase qoldiqlari paydo bo'ldi, bu esa quyi oqimdagi RNK eksperimental operatsiyalariga, masalan, in vitro transkripsiyasiga ta'sir qiladi.

Tavsiya: Foregene seriyali nuklein kislotasiisolation to'plamlari RNKni qo'shimcha RNase qo'shmasdan olib tashlashi mumkin,shunday bukkal tampon/FTA kartasi DNK izolyatsiyasi to'plamikerak't RNase qo'shing;Bufer PW yuvish tozalash ustuni uchun ko'rsatmalarga rioya qiling va bu bosqichni o'tkazib yuborib bo'lmaydi.

4. Etanol qoldig'i.

Tahlil: Bufer WB tozalash ustunini yuvgandan so'ng bo'sh trubkani santrifüj qilishni amalga oshirmadi.

Tavsiya: Ko'rsatmalarga muvofiq bo'sh trubkani to'g'ri santrifüjlash operatsiyasini bajaring.

5. Boshqa nopoklik ifloslanishi.

Tahlil: Saqlangan namunalar yoki maxsus namunalar oldindan ishlov berilmaydi.

Tavsiya: Namunani ko'rsatmalarga muvofiq yaxshilab oldindan davolang.