1: Tajribaviy materiallarni vaqtida almashtiring

Salbiy boshqaruvni (NTC) o'rnating va uni ko'p marta takrorlang.Laboratoriyada PCR mahsuloti bilan ifloslanganligi aniqlangandan so'ng, barcha eksperimental materiallarni o'z vaqtida almashtiring.Masalan: primerlarni qayta suyultirish va tayyorlash, pipetka uchini, EP trubkasini, ddH2O va boshqalarni qayta sterilizatsiya qilish, yangi pipetka bilan almashtirish va PCR tajribalarini o'tkazish uchun vaqtincha boshqa laboratoriyalarni olish.Eksperimentni davom ettirishdan oldin, ifloslangan laboratoriya ventilyatsiya qilinishi va PCR mahsulotining ifloslanishi bartaraf etilgunga qadar ultrabinafsha nurlar bilan nurlanishi kerak.

2: UV ta'sir qilish vaqtini uzaytiring

Shunisi e'tiborga loyiqki, DNKning ifloslanishini olib tashlash uchun muntazam ultrabinafsha nurlanishni odatdagidan 2 soatga uzaytirish kerak.Shunga qaramay, UV nurlanishining DNK ifloslanishining kichik qismlarini (200bp dan past) olib tashlashga ta'siri hali ham yaxshi emas.

Ultraviyole to'lqin uzunligi (nm) odatda 254/300 nm ni tashkil qiladi va 30 daqiqa davomida nurlanish uchun etarli.Shuni ta'kidlash kerakki, qoldiq PCR mahsulotlarining ifloslanishini bartaraf etish uchun UVni tanlashda PCR mahsulotining uzunligi va mahsulot ketma-ketligidagi asoslarning taqsimlanishi e'tiborga olinishi kerak.UV nurlanishi faqat 500 zarbadan yuqori bo'lgan uzun bo'laklar uchun samarali bo'ladi va qisqa bo'laklarga kam ta'sir qiladi.

UV nurlanishida PCR mahsulotidagi pirimidin asoslari dimerlarni hosil qiladi.Ushbu dimerlar kengayishni to'xtatishi mumkin, ammo DNK zanjiridagi barcha pirimidinlar dimerlarni hosil qila olmaydi va UV nurlanishi ham dimerlarni buzishi mumkin..Dimer hosil bo'lish darajasi UV to'lqin uzunligiga, pirimidin dimerining turiga va dimer joyiga ulashgan nukleotidlar ketma-ketligiga bog'liq.Shuning uchun, agar PCR kuchaytirilgan bo'laklar kichik bo'lsa, UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimidan foydalanish tavsiya etiladi.

3: Odatda ishlatiladigan DNK ifloslanishini tozalash vositalari

Pipetalar qo'shilganda aerozollar osongina hosil bo'ladi, buning oldini olish qiyin va u tezda cho'kadi.Shuning uchun, shubhasiz, DNK ifloslanishining tarqalishini oldini olish uchun maxsus DNK ifloslantiruvchi tozalash vositalaridan tez-tez foydalanish yaxshi tanlovdir.

4: UNG ifloslanishga qarshi tizimidan foydalaning

PCR mahsulotining ifloslanishi olib tashlanganidan so'ng, sinov laboratoriyasi PCR mahsulotining ifloslanishini oldini olish uchun UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimidan foydalanishi mumkin.Umumiy laboratoriyalarda siz oddiy eksperimental qismlarni bajarishingiz, PCR mahsuloti maydonini boshqa hududlardan qat'iy ravishda ajratishingiz, muayyan laboratoriya qoidalari va qoidalarini belgilashingiz va PCR mahsulotining ifloslanishining oldini olish uchun tegishli treninglarni o'tkazishingiz mumkin.

Tavsiyalar: O'rtacha PCR laboratoriyasini yaratish, yaxshi PCR muhitini saqlash, standart PCR operatsion protseduralarini shakllantirish va eksperimentchilarning qattiq operatsion xabardorligini oshirish PCR tajribalarining ifloslanishini oldini olish yoki kamaytirishning kalitidir.