SOP tizimini qurish

Eksperiment xodimlarining xatti-harakatlarini standartlashtirish uchun PCR eksperimenti SOPni o'rnating.

Eksperimentchilar operatsiya tartib-qoidalariga qat'iy rioya qiladilar va inson omillari sabab bo'lishi mumkin bo'lgan PCR ifloslanishini minimallashtiradi yoki operatsiyada ifloslanishning oldini oladi.Bundan tashqari, eksperimentator tegishli kasbiy bilim va ko'nikmalarga ega bo'lishi kerak, shu jumladan tegishli asbob-uskunalarni boshqarish, butun ish jarayonini aniqlashtirish, ifloslanishni davolash usullari va laboratoriya sifatini nazorat qilish usullarini o'zlashtirish va sinov natijalarini to'g'ri talqin qilish qobiliyati.

Standart PCR laboratoriyasini qurish

PCR laboratoriyasi printsipial jihatdan to'rtta sohaga bo'lingan, ya'ni reagent tayyorlash maydoni, namunani qayta ishlash maydoni, kuchaytirish maydoni va kuchaytirish mahsulotini tahlil qilish maydoni.Dastlabki ikkita maydon kuchaytirilishdan oldingi maydonlar, oxirgi ikki maydon esa kuchaytirishdan keyingi maydonlardir.Kuchaytirishdan oldingi zonani va kuchaytirishdan keyingi zonani qat'iy ravishda ajratish kerak.Tajriba materiallari, reagentlar, qayd qog‘ozi, ruchkalar, tozalash materiallari va boshqalar faqat kuchaytirilishdan oldingi maydondan kuchaytirilgandan keyingi maydonga, ya’ni reagent tayyorlash maydonidan, namunani qayta ishlash maydonidan, kuchaytirish maydonidan va kuchaytiruvchi mahsulotni tahlil qilish maydonidan oqishi mumkin va teskari yo‘nalishda oqmasligi kerak.Laboratoriyadagi havo oqimi, shuningdek, teskari yo'nalishda emas, balki kuchaytirilishdan oldingi hududdan keyingi qismga o'tishi kerak.

Eksperimental bosqichlarni qisqartiring

Agar laboratoriya faqat PCRni aniqlash va identifikatsiyalashni amalga oshirsa, an'anaviy PCR o'rniga floresan miqdoriy PCRdan foydalanish tavsiya etiladi.

Floresan miqdoriy PCRni aniqlash natijalari floresan signallari bilan to'planishi va tahlil qilinishi mumkin, shuning uchun reaktsiyadan so'ng elektroforez uchun qopqoqni ochishning hojati yo'q, bu aerozollarni hosil qilish uchun reaktsiya mahsulotlarining oqishi natijasida yuzaga kelgan PCR mahsulotlarining ifloslanishini oldini oladi.Jel elektroforezining yuklash bosqichida qopqoq teshiklari sonini ko'paytirsangiz, aerozol bilan ifloslanish paydo bo'lishi mumkin.Miqdoriy PCRni qo'llashni rag'batlantirish va asta-sekin sifatli PCRni almashtirish tavsiya etiladi.

UNG ifloslanishga qarshi tizimini qabul qiling

PCR reaktsiyasi uchun UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimi qo'llaniladi.

Tizim dTTP o'rniga dUTP dan foydalanadi.PCR reaktsiyasidan so'ng barcha PCR mahsulotlari (DNK fragmentlari) dUTP bilan birlashtiriladi;PCR reaktsiyasining keyingi bosqichida tizimga qo'shilgan UNG fermenti o'ziga xos bo'lishi mumkin bo'lgan PCRdan oldin 37 ° C da 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi, bu dUTP o'z ichiga olgan barcha DNK fragmentlarini parchalaydi va keyin PCR reaktsiyasini amalga oshiradi.Bu PCR mahsulotlaridan kelib chiqqan aerozol ifloslanishini butunlay olib tashlashi mumkin.Effekt quyidagi rasmda ko'rsatilgan:

Eslatma: To'g'ridan-to'g'ri PCR seriyasi uchun siz FJ Biotech kompaniyasining PCR mahsulotining ifloslanishiga qarshi tizimining seriyali mahsulotlarini tanlashingiz mumkin.

Taklif qiling

Keng miqyosli genotiplash sinovlarini o'tkazadigan laboratoriyalar uchun oqilona laboratoriyalar qurishdan tashqari, reagentlarni sinash uchun UNG anti-PCR mahsulotining ifloslanish tizimidan foydalanish tavsiya etiladi.

Eslatma: Ushbu tizimdan foydalanish allaqachon yuzaga kelgan PCR mahsulotining ifloslanishini bartaraf eta olmaydi.Shuning uchun, UNG tizimi tegishli testning boshida ishlatilishi kerak va UNG tizimi PCR mahsulotlarini ifloslanishini oldini olish uchun har doim PCR kuchaytirilishi uchun ishlatilishi kerak.Noto'g'ri ijobiy.

Keng miqyosli sinovlarni o'tkazishda Forge Biotech kompaniyasining Direct PCR-UNG tizimidan foydalanish tavsiya etiladi, masalan: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

O'simlik urug'i to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；

Hayvon to'qimalarining to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；

Sichqoncha quyruq to'g'ridan-to'g'ri PCR to'plami-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Foregene kompaniyasining ushbu to'plamlari nafaqat PCRni tez va keng miqyosda aniqlashni amalga oshirishi, balki PCR mahsulotining ifloslanishini samarali oldini olish va nazorat qilish imkonini beradi.