Hot-start Taq fermenti keng qo'llaniladi.Oddiy DNK polimeraza bilan solishtirganda, issiq boshlang'ich Taq fermenti ba'zi bir o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirilishdan va primer dimerlarning shakllanishidan samarali qochishi mumkin va maqsadli gen amplifikatsiyasining muvaffaqiyat darajasini samarali oshirishi mumkin.Ayniqsa, genetik test sohasida issiq startli Taq fermenti sanoatda majburiy standart sifatida aniqlangan va oddiy DNK polimeraza ishlatilmasligi kerak.Yuqoridagilardan ko'rinib turibdiki, issiq startli Taq fermentlari keng qo'llaniladi.Hozirgi vaqtda ichki bozorda issiq startli Taq fermentlarining ko'plab markalari mavjud, ammo yuqori sifatli issiq startli Taq fermentlari ko'p emas.Ko'plab issiq boshlangan Taq fermenti mahsulotlariga duch kelsak, qanday tanlashimiz kerak?

1. Kuchaytirish samaradorligi yuqori bo'lgan issiq ishga tushirish Taq fermentini tanlang

PCR kuchaytirish samaradorligi Taq fermenti ishlashi bilan chambarchas bog'liq.Yaxshi Taq fermenti reaktsiyasi tizimi optimallashtirilgandan so'ng, kuchaytirish samaradorligi 95% dan yuqori va boshlang'ich shablon miqdorini kuchaytirish oralig'i keng.Maqsadli gen tarkibi past bo'lsa, qoniqarli kuchaytirishni olish mumkin va shablon miqdori yuqori bo'lganda zaharlanish oson emas va eksponensial kuchaytirish davri uzoq.Yomon ishlashga ega bo'lgan Taq fermenti uchun, reaksiya tizimi ko'p marta optimallashtirilgan bo'lsa ham, kuchaytirish samaradorligi hali ham 90% dan kam, kuchaytirish egri chizig'ining "S" shakli aniq emas, qiyaligi kichik va egri tekis.Shablon miqdori kam bo'lsa, uni kuchaytirib bo'lmaydi va shablon miqdori yuqori bo'lsa, kuchaytirish effekti ideal emas.Shuning uchun yuqori kuchaytiruvchi samaradorlikka ega DNK polimerazalarini tanlash PCR va qPCR muvaffaqiyati uchun hal qiluvchi ahamiyatga ega.

2. Kuchli ferment quvvatiga ega issiq ishga tushiriladigan Taq fermentini tanlang

Taq fermentining enzimatik kuchi kuchaytirish samaradorligi bilan bog'liq.Umuman olganda, issiq ishga tushiriladigan Taq fermentining fermentativ kuchi qanchalik kuchli bo'lsa, PCR kuchaytirilishining eksponentsial o'sish davri qanchalik uzoq bo'lsa, "S-shaklidagi" egri chiziq qanchalik tipik bo'lsa, floresan signal qiymati qanchalik baland bo'lsa va multipleks PCRni aniqlash uchun mos keladi.Zaif enzimatik quvvatga ega bo'lgan DNK polimerazalari odatda faqat 2-pleks reaktsiyalarini qo'llab-quvvatlaydi.3-pleks reaktsiyalarini bajarayotganda, kuchaytirish egri chizig'i past, floresan signal qiymati past va odatdagi kuchaytirish egri chizig'i yo'q, shuning uchun natijalarni baholash qiyin.

3. Yuqori sezuvchanlikka ega issiq ishga tushiriladigan Taq fermentini tanlang

Umuman olganda, DNK polimeraza yuqori kuchaytirish samaradorligi va yuqori sezuvchanlikka ega, ammo nomuvofiqliklar ham mavjud.Agar kuchaytirilishi kerak bo'lgan namunaning maqsadli gen ko'pligi past bo'lsa, Taq fermentining kuchaytirilish sezgirligini tekshirish tavsiya etiladi.Aniqlashning eng keng tarqalgan usuli - maqsadli gen plazmid fragmentini 10 yoki 5 marta gradient suyultirish, pastki suyultirishda PCR aniqlashni amalga oshirish va yuqori aniqlanish sezgirligi bilan issiq start Taq fermentini tanlash.

Yuqoridagilardan ko'rinib turibdiki, tadqiqotchilar o'zlarining eksperimental talablari va moliyalashtirish shartlariga ko'ra tanlashlari kerak.Issiq ishga tushirish Taq fermentining kuchaytirish samaradorligi va sezgirligini aniqlash uchun gradient suyultirishni kuchaytirish tajribasini o'tkazish eng yaxshisidir.

Foregene misoli's Taq DNK polimeraza:

Foreasy HS Taq DNK polimeraza

Tavsif

Foreasy HS Taq DNK polimeraza - bu Escherichia coli muhandislik bakteriyalarida gen rekombinatsiyasi texnologiyasi bilan ifodalangan DNK polimeraza.Ferment noyob reaksiya tamponi bilan birlashtirilgan bo'lib, bu mahsulotni yuqori darajada chidamli va mos qiladi va aniqlanish reaktsiyalari uchun shablon sifatida namuna lizatidan (Foregene Lysis tizimi) bevosita foydalanishi mumkin.

Ilova

Sifatli PCR va tozalangan shablonlarni va tozalanmagan shablonlarni miqdoriy PCR aniqlash.

Sifat nazorati

1.Ekzogen nukleaza faolligi aniqlanmadi

2. Xostsiz qoldiq genomik DNKni aniqlash uchun PCR usuli

3. Inson genomidagi bir nusxali genlarni samarali ravishda kuchaytirishi mumkin

4.Bir hafta davomida xona haroratida saqlang, aniq faollik o'zgaradi

Mahsulot tafsilotlari: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/