Qo'rg'oshin

Uzoq kodlanmaydigan RNK, lncRNA kodlanmaydigan RNK bo'lib, uzunligi 200 nukleotiddan ortiq, odatda 200-100000 nt oralig'ida.lncRNA epigenetik, transkripsiya va post-transkripsiya darajasida gen ekspressiyasini tartibga soladi va X-xromosomaning o'chirilishi, genomning imprinatsiyasi va xromatin modifikatsiyasi, transkripsiya faollashuvi, transkripsiya aralashuvi, yadro transporti, hujayra siklini tartibga solish, hujayra differensiatsiyasini tartibga solish va boshqa ko'plab ta'sirlar bilan bog'liq bo'lgan kompensatsiya jarayonlarida ishtirok etadi. inson kasalliklarining paydo bo'lishi, rivojlanishi va oldini olish va hozirgi vaqtda biotibbiyot sohasidagi eng issiq nuqtalardan biri hisoblanadi.

01  LncRNA turlari va xususiyatlari

Yuqoridagi rasmda ko'rsatilganidek, lncRNK turli xil shakllanish manbalariga ko'ra ko'p turlarga bo'linadi.Quyidagi xususiyatlarga ega:

1. lncRNKlar odatda uzunroq bo'lib, differensiallanish vaqtida dinamik ifoda va turli xil biriktirish usullariga ega
2. Kodlash genlari bilan solishtirganda, lncRNA odatda pastroq ifoda darajasiga ega
3. Ko'pchilik lncRNKlar to'qimalarning differentsiatsiyasi va rivojlanishi jarayonida aniq vaqtinchalik va fazoviy ifoda o'ziga xosligiga ega.
4. Shish va boshqa kasalliklarda xarakterli ifodalar mavjud
5. lncRNK ning hujayra osti joylashuvi xilma-xildir
6. Ketma-ketlik saqlanishda past, lekin funksiya ma'lum darajada saqlanish darajasiga ega va hokazo.

02 LncRNA teskari transkripsiyasi haqida tez-tez so'raladigan savollar

Hujayralardagi lncRNK ning past miqdori, uzun uzunligi va yuqori darajadagi tuzilishi tufayli bunday RNK ko'pincha ildiz halqalari yoki soch iplari kabi murakkab tuzilmalarga ega va RT-qPCR muvaffaqiyatsiz teskari transkripsiya yoki past samaradorlik muammolariga moyil.

03 LncRNA teskari transkripsiya eritmasi

Markaziy qoidada RNK viruslarining o'zlarining teskari transkriptazalaridan foydalanib, DNKni RNKdan shablon sifatida sintez qilish jarayoni teskari transkripsiya deb ataladi.In vitroda cDNK shablonini sintez qilish uchun RNK virusi teskari transkriptazasidan foydalanish jarayoni teskari transkripsiya deb ataladi.Teskari transkripsiya tizimiga kiritilgan asosiy elementlar: RNK shabloni, teskari transkriptaza, primerlar va boshqa komponentlar.

1.RNK shabloni

RNK shablonining teskari transkripsiyaga ta'siri uning tuzilishi, tozaligi va yaxlitligida namoyon bo'ladi.Olingan RNKning tozaligi va yaxlitligi qanchalik yuqori bo'lsa, teskari transkripsiyaning samaradorligi shunchalik yuqori bo'ladi va keyingi miqdoriy natijalar aniqroq bo'ladi.Keng tarqalgan ishlatiladigan RNK ekstraktsiya reagentlari bilan tozalangan RNK ko'pincha spirtli ichimliklar va guanidin tuzlarining qoldiqlarini o'z ichiga oladi, ular ko'pchilik teskari transkriptazaga kuchli inhibitiv ta'sir ko'rsatadi.

2. Teskari transkriptaza

Teskari transkriptaza butun teskari transkripsiya tizimiga asosiy ta'sir ko'rsatadi.Ko'pgina laboratoriyalarda ishlatiladigan teskari transkriptaza uchun mos harorat odatda 42 ° C dir.Aslida, yuqori darajadagi RNK strukturasining ochilishi yuqori haroratni talab qiladi va teskari transkriptaza uchun talablar yuqoriroqdir.

3.Astar

Teskari transkripsiya primerlariga genga xos primerlar, tasodifiy primerlar va Oligo dT primerlari kiradi.Aksariyat lncRNAlarda polyA dumlari mavjud emas va tasodifiy primerlarni Oligo dT bilan to'g'ri moslashtirish muhimdir.

4. Boshqa komponentlar

RNK ayniqsa oson parchalanishini hisobga olgan holda, teskari transkripsiya tizimiga tarkibiy qismlarning kiritilishini minimallashtirish mumkin, bu RNazning kirishini samarali ravishda oldini oladi va teskari transkripsiyaning silliq rivojlanishini ta'minlaydi.

ForegenRNK shablonidan, qPCR ga teskari transkripsiyadan oladi

lncRNA aniqlashingizni har tomonlama kuzatib boring

Hayvonlarning umumiy RNKsi IeritmaKit (gDNKni olib tashlash ustuni bilan)

Hujayra umumiy RNK IeritmaKit (gDNKni olib tashlash ustuni bilan)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase bilan)(lncRNA dan birinchi zanjirli cDNK sintezi uchun super premiks)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aafzalliklari ofRNK ekstraktsiyasi:

To'plam uchinchi avlod RNK ekstraktsiya texnologiyasidan foydalanadi, DNase-dan foydalanish shart emas.

96, 24, 12 va 6-quduqli plastinka madaniyatli hujayralardan 11 daqiqa, gDNKsiz, yuqori toza, yuqori sifatli umumiy hujayra RNKining yuqori samarali ekstraktsiyasi.

LncRNA teskari transkripsiyasining afzalliklari:

Genomik DNK ifloslanishini tezda olib tashlash uchun LncRNA uchun maxsus ishlab chiqilgan teskari transkripsiya tizimi.

Teskari transkripsiya tizimi yuqori termal barqarorlikka ega va hali ham 50 ° C da yaxshi teskari transkripsiya ko'rsatkichlariga ega.

Yuqori GC tarkibiga va murakkab ikkilamchi tuzilishga ega shablonlarni yuqori samaradorlik bilan qaytarish mumkin.

Afzalliklarof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polimerase yuqori kuchaytirish samaradorligi, yuqori kuchaytirish sezuvchanligi va yuqori kuchaytirish o'ziga xosligiga ega.

Optimallashtirilgan Real PCR Easy Mix SYBR Green I ni yuqori sezuvchanlikka ega qiladi va uning floresan intensivligi shunga o'xshash mahsulotlardan 3-5 baravar ko'p bo'lib, har xil turdagi floresan miqdoriy tajribalarining ehtiyojlarini qondira oladi.