Qancha bilasiz

N haqidauklein kislotasi ekstraktsiyasi

Tozalangan nuklein kislotaning boshlanishi va oxiri

Boshida hamma narsa qiyin, tozalangan nuklein kislota eng ko'p

Keyingi tajribalar uchun molekulyar tajribalarni boshlash

Muvaffaqiyat yoki muvaffaqiyatsizlik hal qiluvchi ta'sirga ega.

Izli/ultra-izli UV spektrofotometri ko'plab ilmiy tadqiqotchilar tomonidan ma'qullanadi, chunki u nuklein kislota kontsentratsiyasini, oqsil va tuz ionlari qoldiqlarini oddiy, tez va tejamkor tarzda aniqlay oladi.

Hammamizga ma'lumki, A260 nuklein kislotaning absorbsiyasi OD qiymatini bildiradi, A280 oqsil kontsentratsiyasining absorbsiyasi OD qiymatini bildiradi, A230 tuz ionlari konsentratsiyasining absorbsiyasi OD qiymatini bildiradi, shuning uchun A260 nuklein kislota konsentratsiyasini o'zgartira oladi, A260/280 oqsil qoldig'ini, A260/230 tuz ioni qoldig'ini anglatadi, ammo bu tadqiqot natijalariga ko'ra ko'p sonli o'lchovdir.an'anaviy” DNK va RNKning tozaligini tushuntira olishiga ishonishma'lum darajada.Bu nuklein kislotaning hosildorligi va tozaligini aniqlash uchun yagona standart emas, u faqat mos yozuvlar sifatida ishlatiladi va u "oltin standart" emas.

Thermo Fisher ND-2000 qo'llanmasi sinov natijalarining ishonchliligini ta'kidlaydi

Buning sababi shundaki, mikro/ultramikro UV spektrofotometr yordamida olingan natijalar faqat yon tomondan nuklein kislotaning chiqishi va tozaligini aks ettiradi va ko'plab ta'sir qiluvchi omillar mavjud (optik yo'l, namuna hajmi, namuna kontsentratsiyasi, pH qiymati, absorbsiyani o'lchashga ta'sir qiluvchi boshqa ionlar va boshqalar). , o'lchangan OD qiymati har doim ham aniq emas.Shu bilan birga, absorbans qiymatini aniqlash materialining o'ziga xosligi yo'qligi sababli, bitta zanjirli DNK, ikki zanjirli DNK, RNK, dNTPlar va ba'zi oqsillar 260 nm to'lqin uzunligida yutilish cho'qqilariga ega va faqat A260 tomonidan aniqlangan konsentratsiya haqiqiy DNK yoki RNK bo'lishi shart emas.Konsentratsiya, uning yaxlitligi va degradatsiyasini hukm qilib bo'lmaydi.

Xo'sh, bizning tozalangan nuklein kislotamiz sifatini qanday baholash mumkin?Aniqlash uchun mikro/ultramikro UV spektrofotometridan foydalanishdan tashqari, nuklein kislotaning tozaligi va yaxlitligini vizual tarzda ko'rsatish va ma'lum darajada konsentratsiyani ko'rsatish uchun agaroz gel elektroforezi kabi usullar ham talab qilinadi.Shu tarzda, turli usullarni aniqlash natijalaridan olingan nuklein kislotasi unumi va tozaligi ishonchli hisoblanadi.

Eksperimental diagramma taqqoslash

H1299 xujayralarining genomik DNKsi A kompaniyasining DNK ekstraktsiya to'plamlari yordamida ekstraksiya qilindi va sezilarli nopoklik bilan ifloslangan, natijada yuqori OD qiymatlari paydo bo'ldi.

(OD o'lchov qiymati va tegishli elektroferogramma)

Baholash indeksi

Nuklein kislotaning hosildorligi va sifatini tekshirish uchun "oltin standart" bormi?

Bizga ma'lumki, oddiy, tez va arzon usul yo'q.Spektrofotometrmi, gel elektroforezmi yoki massa spektrometriyami, ularning barchasi eritmadagi nuklein kislotaning kontsentratsiyasi va tozaligini turli jihatlardan aks ettiradi va ular bir-biriga murojaat qilib baholanishi kerak.

Eng yaxshi baholash indeksi har doimkeyingi eksperimental dastur.Bu teskari transkripsiya va PCR kuchaytirilishining samaradorligiga ta'sir qilmaydi.Ishonchli kuchaytiruvchi mahsulotlar va Ct qiymatlarini olish va ketma-ketlik bilan to'liq ketma-ketlikni olish nuklein kislotani muvaffaqiyatli ekstraksiya qilishdir.

Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, faqat nisbatlar nazariyasi nuqtai nazariga "yaxshi eksperimental natijalarni yaxshi ekstraktsiya parametrlari sifatida ishlatish" nuqtai nazaridan e'tiroz bildirish kerak!

Yuqori DNK/RNK tozaligini olish uchun tavsiya etilgan Foregene DNK RNK ekstraksiya to'plamlari:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/