Laboratoriya tekshiruvi namunalar to'plashdan boshlanadi va namunalarni to'plash eng oson e'tibordan chetda qoladi.Namuna olish uchun eng muhim narsa to'g'ri namuna turini tanlash, tegishli namuna olish vositalaridan foydalanish va oqilona tashish va qayta ishlashni amalga oshirishdir.

I. Namuna turi

Umumiy namuna turlari quyidagilardir:

Namuna olish usuli qishloq xo‘jaligi savdo (bozori) bozorida yangi koronavirusning ekologik monitoringi uchun texnik shartlarga murojaat qilishi mumkin”:

1. Amaliyotchilarning tomoq, qo'llari, kiyimlari va boshqa buyumlaridan tampon namunalari: virusni saqlovchi eritmani virus namunasi trubkasida ishlatish va namuna olish paxta tamponlariga to'liq infiltratsiya qilish kerak.Er yuzasi) qayta-qayta qo'llaniladi va 3 martadan ko'proq yuviladi.Shu bilan birga, namuna olingan ob'ekt yuzasida ko'p nuqtali taqsimlangan namuna olishni amalga oshirish kerak.

2. Oziq-ovqat sirtidan tampon namunalari: Oziq-ovqat namunalarini to'g'ridan-to'g'ri yig'ib bo'lmaydi.To'planishi kerak bo'lgan oziq-ovqat ehtiyotkorlik bilan ajratilishi va tampon namunalarini olishdan oldin toza namuna sumkasida saqlanishi kerak.Namuna olinadigan paxta novdasini to'liq ho'llashdan so'ng, to'planishi kerak bo'lgan oziq-ovqat namunasi yuzasini 3 martadan ko'proq surtish va chayish uchun virus namunasi trubkasida virusni saqlovchi eritmadan foydalanish kerak.Shu bilan birga, namuna yuzasida ko'p nuqtali taqsimlangan namuna olishni amalga oshirish kerak.

3. Kanalizatsiya namunalari: Bozorda drenaj tizimining taqsimlanishiga ko'ra, ichki quvur tarmog'i yig'ilishiga, suv oqimi yo'nalishining quyi oqimiga yoki shahar quvurlari tarmog'iga ulanishga e'tibor qaratib, 2-3 ta kanalizatsiya namunasini olish joyini tanlang.Tampon namunasini yig'ish uchun uni kanalizatsiya suviga namlash uchun paxta tayoqchasi bilan botiring va uni kanalizatsiya trubkasida 3 martadan ko'proq yuving.Kanalizatsiya namunalarini yig'ish uchun 30-500 ml kanalizatsiya namunalarini yig'ish uchun polietilen plastik butilkalardan foydalaning;500 ml dan ortiq hajmdagi oqova suvlarni yig'ish uchun polietilen plastmassa chelaklar yoki joylarda suv namunasini boyitish uchun maxsus jihozlardan foydalanish mumkin.Shu bilan birga, kanalizatsiya namunalarini olish joyi uchun ko'p nuqtali taqsimlangan namuna olishni o'tkazish kerak.

4. Hayvonlardan namunalar: Tirik hayvonlar uchun namuna olish tamponlari tana yuzasi tamponlari, orofaringeal tamponlar va anal tamponlarni yig'ish uchun ishlatilishi mumkin, shuningdek, najas yoki sekretsiya namunalari ham to'planishi va qayd varag'ida qayd etilishi mumkin.Teri tozalangan hayvonlar namunalari va hokazolar uchun ularning tana yuzasi va tana bo'shlig'i namunalarini yig'ish uchun paxta tayoqchalaridan foydalaning.Namuna olinadigan paxta tayoqchasiga to'liq infiltratsiya qilish uchun virus namunasi trubkasida virusni saqlovchi eritmadan foydalanish kerak, so'ngra olinadigan oziq-ovqat namunasi yuzasini qo'llashni takrorlang.Shabu 3 martadan ortiq.Shu bilan birga, namuna yuzasida ko'p nuqtali taqsimlangan namuna olishni amalga oshirish kerak.

5. Boshqa jihozlar: qafaslar yoki baliq tanklari kabi hayvonlarni tashish va ko'paytirish uchun konteynerlar.Birinchidan, idishda saqlanadigan va o'stirilgan hayvonlarning o'ziga xos turlarini kuzating yoki tushuning va idishning ichki devoriga tampon namunalarini yoki tarkibidagi suyuqlik namunalarini to'plang.

6.Odamlar to'planadigan joylarda, yomon shamollatiladigan mahalliy savdo maydonchalarida, ofislarda va dam olish xonalarida aerozol namunalarini to'plang.

II.Namuna olish vositalari
1. Qon olish trubkasi
Agar siz nuklein kislotasi sinovini va antikoagulyant namunalarni keyinroq qilishingiz kerak bo'lsa, qon to'plash uchun EDTA antikoagulyantini o'z ichiga olgan vakuumli qon tomiridan foydalanish tavsiya etiladi;sarum namunalari uchun antikoagulyantsiz vakuumli qon tomiridan foydalanish tavsiya etiladi.

2. Namuna olish uchun tampon

Kaltsiy aljinatli tamponlar yoki yog'och tirgaklar o'rniga polipropilen tamponlardan foydalanish tavsiya etiladi, chunki ular ma'lum viruslarni faolsizlantiradigan va PCR testini inhibe qiluvchi moddalarni o'z ichiga olishi mumkin.Paxta boshlari bo'lgan tamponlardan foydalanish mumkin emas, chunki paxta tolalari oqsilning kuchli adsorbsiyasiga ega va keyingi saqlovchi eritmaga osonlikcha o'tkazilmaydi.

“Yangi Koronavirus nuklein kislotalarini 10-in-1 aralash yig‘ish va aniqlash uchun texnik spetsifikatsiyalar”da “namuna oluvchi tampon poliester, neylon va boshqa paxta va kaltsiy bo‘lmagan alginat materiallaridan, tutqich esa yog‘och bo‘lmagan materialdan tayyorlanishi kerakligi aniq belgilab qo‘yilgan.Buzilish nuqtasi tampon boshining yuqori qismidan taxminan 3 sm masofada joylashgan bo'lib, uni sindirish oson.

Amerika Qo'shma Shtatlaridagi CDC, shuningdek, "Faqat plastik yoki simli vallar bilan sintetik tolali tamponlardan foydalaning.Kaltsiy alginat tamponlarini yoki yog'och o'qli tamponlardan foydalanmang,chunki ular ba'zi viruslarni faolsizlantiradigan va PCR testini inhibe qiluvchi moddalarni o'z ichiga olishi mumkin.

Hozirgi vaqtda plastik novda bilan birlashtirilgan bir martalik steril neylon floking tampon keng qo'llaniladi.Floklangan tampon suvni yaxshiroq singdirish va chiqarish tezligiga ega.Turli xil namuna olish joylariga ko'ra, tampon boshi ham har xil o'lcham va tolalarga ega.Qalinligi.”

3. Namuna transportini saqlash yechimi

Virusni inaktivatsiyani saqlash eritmasi: tegishli miqdordagi guanidin tuzi konsentratsiyasi va turli xil virus lizis komponentlari virusni nuklein kislotani chiqarish, RNase va DNase faolsizlantirish va nuklein kislotaning yaxlitligini ta'minlash uchun to'g'ridan-to'g'ri lizislashi mumkin, bu esa keyingi qPCR aniqlash uchun ishlatilishi mumkin.Uni virusni etishtirish va izolyatsiya qilish uchun ishlatish mumkin emas.

Virusni tashish va saqlash uchun eritma: virusning faolligini saqlab turishi mumkin bo'lgan virusning omon qolishi uchun zarur bo'lgan tuzlar, aminokislotalar, vitaminlar, glyukoza va oqsillarni o'z ichiga oladi.Kelajakda u nuklein kislotasini olish va virusni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin, shuningdek, virusni etishtirish va ajratish uchun ham ishlatilishi mumkin.

4. Namunani saqlash trubkasi va namuna sumkasi

Namuna saqlash trubkasi nuklein kislotani adsorbsiya qilmaydigan vintli qopqoqli steril plastik naycha bo'lishi kerak.Namuna oqishi va ifloslanishini oldini olish uchun har bir namuna trubkasi namuna sumkasi bilan qoplangan bo'lishi kerak.

III.Namunadagi aralashuvchi moddalar

PCR tajribalarida aralashuvchi moddalar

1. endogen interferent

Tana namunasida mavjud bo'lgan moddalar boshqa moddalarni aniqlashga xalaqit berishi mumkin.

Qon:gem (>1mg/ml), gemin (>0,1ng/ml), triglitseridlar, IgG va boshqalar;

Siydik:Karbamid (20 mM);

Tabure:o'simlik polisakkaridlari, xolat;

To'qima:proteaz, kollagen;

Sut: proteaza, kaltsiy ioni;

Giyohvand moddalar: antibiotiklar, antiviral preparatlar, gormonlar va boshqalar.

boshqa.

2. ekzogen interferent

Bu in vitroda boshqa moddalarni aniqlashga xalaqit beradigan moddalardan kelib chiqadi.Namuna olish va qayta ishlash jarayonida qo'shilishi mumkin bo'lgan namunalar va moddalar:

Sinov materiallari: sarum ajratish jeli, namuna olish idishi va rezina tiqin, kateter, kateter yuvish suyuqligi, qo'lqop kukuni va boshqalar.

Antikoagulyant: geparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM) va boshqalar;

Organik erituvchilar: izopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil sulfoksid, formamid, glitserin, PEG va boshqalar;

Dezinfektsiyalash vositalari: spirtlar (etanol>1%), aldegidlar, fenollar (fenol>0,2%), peroksidlar, kuchli kislotalar (HCL), kuchli ishqorlar (NaOH) va boshqalar;

Yuvish vositasi:SDS (>0,005%);

Tuproq: Humus

Bo'yoq: Indigo

boshqa.

Haqiqiy tashqi namuna olish sharoitida, masalan, atrof-muhit namunalarini yig'ish, namunalar turli xil aralashuvchi moddalarni o'z ichiga olishi mumkin va har bir joyda aralashuvchi moddalarning tarkibi boshqacha bo'lib, mahalliy sharoitlarga muvofiq PCR aralashuvi tajribalarini o'tkazishni talab qiladi.

IV.Namunalarni saqlash va tashish shartlari

Yangi to'plangan klinik namunalar yig'ilgandan keyin 2-4 soat ichida 2 ° C dan 8 ° C gacha bo'lgan haroratda laboratoriyaga yuborilishi kerak.24 soat ichida 4 ℃ haroratda saqlang.Virusni izolyatsiya qilish va nuklein kislotani aniqlash uchun ishlatiladigan namunalar imkon qadar tezroq sinovdan o'tkazilishi kerak.24 soat ichida sinovdan o'tkazilishi mumkin bo'lgan namunalar 4 ° C da saqlanishi mumkin;24 soat ichida aniqlab bo'lmaydigan namunalar -70 ° C yoki undan past haroratda saqlanishi kerak (agar bo'lmasa - 70 ° C da, muzlatgichda -20 ° C da saqlang).

Xulosa:Namunalarni standartlashtirilgan yig'ish, tashish va saqlash keyingi sinovlar uchun juda muhimdir.Ko'pgina laboratoriya testlarining noto'g'ri salbiy ko'rsatkichlari virusli nuklein kislotasining degradatsiyasiga olib keladigan namunalarni noto'g'ri yig'ish, tashish va saqlash natijasida yuzaga keladi.Biroq, ko'pgina laboratoriyalar hali ham namuna olishning ahamiyatini e'tiborsiz qoldiradilar.Umid qilamanki, ushbu maqola namuna olishga barchaning e'tiborini uyg'otadi va ko'proq ilmiy va oqilona namunalar oladi!

Tegishli mahsulot:

SARS-CoV-2 nuklein kislotasini aniqlash to'plami (I) (Multipleks PCR floresan zond usuli) - Braziliya, Janubiy Afrika va Buyuk Britaniyadagi mutantlarni aniqlash uchun