FAQ uchunHayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami

Siz duch kelishi mumkin bo'lgan muammolarning quyidagi tahlilihayvon to'qimalari / hujayra RNK ekstraktsiyasi will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNK olinmaydi yoki RNK hosildorligi past bo'ladi

Ko'pincha tiklanish samaradorligiga turli xil omillar ta'sir qiladi, masalan: to'qima namunasidagi RNK tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.

1. Muzli hammom yoki kriyojenik (4 ° C) santrifüj operatsiya davomida amalga oshirildi.

Tavsiya: Butun jarayon davomida xona haroratida (15-25 ° C) ishlang, muzli hammom va past haroratlarda santrifüj qilmang.

2. Namunani noto'g'ri saqlash yoki ortiqcha namunani saqlash muddati.

Tavsiya: Namunalarni -80 °C haroratda saqlang yoki suyuq azotda muzlatib qo'ying va qayta-qayta muzlatish-eritishdan saqlaning;RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'qima yoki madaniyatli hujayralardan foydalanishga harakat qiling.

3. Namuna lizisining etarli emasligi.

Tavsiya: To'qimalarni homogenlashtirganda, to'qimalarning etarlicha homogenlanganligiga ishonch hosil qiling va to'qima hujayralari RNKning chiqarilishini tushuntirish uchun etarli darajada bo'linadi.

4. Eluent to'g'ri qo'shilmagan.

Tavsiya: RNase-Free ddH ekanligini tasdiqlang₂O tozalash kolonnasi membranasining o'rtasiga tomchilab qo'shiladi.

5. Bufer RL2 yoki RW2 tamponiga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilmagan.

Tavsiya: Ko'rsatmalarga rioya qiling, to'plamni ishlatishdan oldin bufer RL2 va bufer RW2 ga to'g'ri miqdorda mutlaq etanol qo'shing va yaxshilab aralashtiring.

6. To'qima namunasi dozasi mos emas.

Tavsiya: 10-20 mg to'qima yoki (1-5) × 10 dan foydalaning⁶500 mkl boshiga hujayralar RL1 buferi, chunki ortiqcha to'qimalardan foydalanish RNK ​​ekstraktsiyasini kamaytirishga olib kelishi mumkin.

7. Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq emas.

Tavsiya: Tozalash ustunining elutsiya hajmi 50-200 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH qo'shgandan keyin xona haroratini joylashtirish vaqtini uzaytirish tavsiya etiladi.₂O, masalan, 5-10 daqiqa.

8.Bufer RW2 yuvishdan keyin tozalash ustunida etanol qoldig'i bor.

Tavsiya: Bufer RW2 yuvilganidan keyin etanol qoldig'i bo'lsa, 1 minut davomida bo'sh trubkani santrifüjlash, bo'sh trubkani santrifüj qilish uchun vaqtni 2 daqiqaga oshirish mumkin yoki qoldiq etanolni etarli darajada olib tashlash uchun tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqaga qo'yish mumkin.

Tozalangan RNK parchalanadi

Tozalangan RNKning sifati namunaning saqlanishi, RNazning ifloslanishi va manipulyatsiyasi va boshqalar kabi omillarga bog'liq.

1. To'qimalar namunalari o'z vaqtida saqlanmaydi.

Tavsiya: Agar to'qima namunalari yoki hujayralar yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, darhol -80 ° C yoki suyuq azotda krioservalash.RNKni ajratib olish uchun iloji boricha yangi olingan to'qima yoki hujayra namunasidan foydalaning.

2. To'qimalar namunalarini qayta-qayta muzlatish-eritish.

Tavsiya: Toʻqima namunalarini saqlashda ularni saqlash uchun kichik boʻlaklarga boʻlib kesib, namunani qayta-qayta muzlatish va RNK degradatsiyasiga yoʻl qoʻymaslik uchun ulardan foydalanganda ulardan birini olib tashlash yaxshidir.

3. RNase kiritiladi yoki operatsiya davomida bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiymaydi.

Tavsiya: RNKni ekstraksiyalash tajribalari eng yaxshisi alohida RNK manipulyatsiyasi xonalarida amalga oshiriladi va tajribadan oldin jadval tozalanadi.

Tajriba davomida RNazning kiritilishi natijasida kelib chiqqan RNK degradatsiyasini minimallashtirish uchun bir martalik qo'lqop va niqob kiying.

4. Reaktivlar foydalanish vaqtida RNase bilan ifloslangan.

Tavsiya: Tegishli tajribalar uchun yangi Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami bilan almashtiring.

5. RNK manipulyatsiyasida ishlatiladigan sentrifuga naychalari, uchlari va boshqalar RNase bilan ifloslangan.

Tavsiya: RNK ekstraktsiyasida ishlatiladigan santrifüj naychalari, uchlari, pipetkalari va boshqalarning barchasi RNazsiz ekanligini tasdiqlang.

Tozalangan olingan RNK quyi oqim tajribalariga ta'sir qiladi

Tozalash ustuni bilan tozalangan RNK, agar tuz ionlari, oqsil miqdori juda katta bo'lsa, quyi oqim tajribasiga ta'sir qiladi, masalan: teskari transkripsiya, Northern Blot va boshqalar.

1. Elutsiya qilingan RNK tuz ioni qoldiqlariga ega.

Tavsiya: RW2 tamponiga etanolning to'g'ri hajmi qo'shilganligini tasdiqlang va ish uchun ko'rsatilgan markazdan qochma tezlikda 2 ta tozalash ustunini yuving;agar tuz ioni qoldig'i bo'lsa, tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqa davomida RW2 Buferiga qoldiring va tuz ifloslanishini maksimal darajada olib tashlash uchun santrifüj qiling.

2. Elyusiyalangan RNKdagi etanol qoldig'i.

Tavsiya: RW2 tamponini yuvgandan so'ng, bo'sh trubkani santrifüjlash operatsiyasini ish uchun ko'rsatilgan santrifüjlash tezligida bajarishni tasdiqlang, agar etanol qoldig'i bo'lsa, bo'sh trubkani santrifugalash vaqtini 2 minutga oshiring yoki bo'sh trubkani qayta tiklash uchun uni xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.

Nulsein kislota namunalari turlarini izolyatsiya qilish

Foregene-ning RNK izolyatsiyasi to'plamlari quyidagi namunali suvlardan umumiy RNK izolyatsiyasini/ekstraktsiyasini olishi mumkin: Hayvon to'qimalari, o'simlik, hujayralar, virusli, qon va boshqalar.

To'plamni qanday saqlashim mumkin

Xona haroratida 24 oy davomida saqlanadi.