Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami Hayvon to'qimalari va hujayralari uchun umumiy RNK ekstraktsiyasi va tozalash to'plami
To'plam tavsifi:
Turli hayvonlar to'qimalaridan yuqori toza va sifatli umumiy RNKni tez va samarali ravishda ajratib oling.
RNK degradatsiyasi haqida tashvishlanishga hojat yo'q.Butun tizim RNase-siz
DNKni tozalash ustuni yordamida DNKni samarali olib tashlang
DNaz qo'shmasdan DNKni olib tashlang
Oddiy - barcha operatsiyalar xona haroratida bajariladi
Tez - operatsiya 30 daqiqada bajarilishi mumkin
Xavfsiz - hech qanday organik reagent ishlatilmaydi
Yuqori tozalik - OD260/280≈1,8-2,1
To'plamlar tavsifi
50 ta tayyorgarlik, 200 ta tayyorgarlik
Ushbu to'plamdan foydalanadiaylanish ustuni va formulasibizning kompaniyamiz tomonidan ishlab chiqilgan bo'lib, u turli xil hayvonlar to'qimalaridan yuqori samarali yuqori toza va yuqori sifatli umumiy RNKni ajratib olishi mumkin. Bu samarali DNK-tozalash ustunini ta'minlaydi, bu genomik DNKni supernatant va to'qimalar lizatidan osongina ajratib olish va adsorbsiyalash, oddiy va vaqtni tejaydi;Faqat RNK ustuni RNKni samarali bog'lashi mumkin va bir vaqtning o'zida noyob formula bilan qayta ishlanishi mumkin. Ko'p namunalar.
Butun tizim RNase-Free, shuning uchun olingan RNK buzilmaydi;Bufer RW1, Bufer RW2 tampon yuvish tizimi, natijada olingan RNK oqsil, DNK, ion va organik birikmalar ifloslanishidan xoli bo'ladi.
To'plam komponentlari
| Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami | ||
| To'plam komponentlari | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Bufer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| RL2 buferi | 15 ml | 60 ml |
| Bufer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Bufer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNazsiz ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Faqat RNK ustuni | 50 | 200 |
| DNKni tozalash ustuni | 50 | 200 |
| Qo'llanma | 1 dona | 1 dona |
Mahsulot haqida ma'lumot
| Format | Spin ustuni | Tozalash komponenti | Foregene ustuni, reagent |
| Oqim | 1-24 namunalar | Tayyorgarlik vaqti | ~30 daqiqa (24 ta namuna) |
| Santrifuga | Stol santrifugasi | Pirolizni ajratish | Santrifüj ajralish |
| Namuna | Hayvon to'qimalari;hujayra | Namuna miqdori | To'qimalar: 10-20 mg;Hujayra: (1-5) × 106 |
| Elutsiya hajmi | 50-200 mkl | Maksimal yuklash hajmi | 850 mkl |
Xususiyatlari va afzalliklari
■ RNK degradatsiyasi haqida tashvishlanishga hojat yo'q;butun tizim RNase-siz
■ DNK yordamida DNKni tozalash ustunini samarali olib tashlang
■ DNase qo'shmasdan DNKni olib tashlang
■ Oddiy - barcha operatsiyalar xona haroratida bajariladi
■ Fast-operatsiya 30 daqiqada yakunlanishi mumkin
■ Xavfsiz - hech qanday organik reagent talab qilinmaydi
■ Yuqori tozalik -OD260/280≈1,8-2,1
Kit ilovasi
Turli xil yangi yoki muzlatilgan hayvon to'qimalaridan yoki madaniy hujayralardan umumiy RNKni olish va tozalash uchun javob beradi.
Mahsulot parametrlari
■ Pastki oqim ilovalari: birinchi zanjirli cDNK sintezi, RT-PCR, molekulyar klonlash, Northern Blot va boshqalar.
■ Namunalar: hayvon to'qimalari, madaniy hujayralar
■ Dozaj: to'qimalar 10-20 mg, hujayralar (2-5) × 106
■ Tozalash ustunining maksimal DNKni bog'lash qobiliyati: 80 mkg
■ Elutsiya hajmi: 50-200 mkl
Diagramma
Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami 20 mg dan davolanadi
Yangi sichqoncha namunalari, 5% tozalangan umumiy RNK 1% agar oling
Glikogel elektroforezi
1: taloq 2: buyrak
3: Jigar 4: Yurak
Saqlash va saqlash muddati
To'plam 24 oy davomida xona haroratida (15–25 ℃) yoki 2–8 ℃ haroratda uzoqroq muddatda saqlanishi mumkin.RL1 buferi b-merkaptoetanol qo'shilgandan keyin 1 oy davomida 4 ℃ haroratda saqlanishi mumkin (ixtiyoriy).
Iqtibos qilingan maqolalar
1.AGAR: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R. va boshqalar.Markaziy kompozit dizaynni optimallashtirish orqali jigar bazasini tahrirlash uchun mRNK yuklangan lipidga o'xshash nanopartikullar.Adv.Funktsiya.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.AGAR: 18.187:He X, Hong V, Yang J va boshqalar.Terapevtik ildiz hujayralarini tayyorlashda hujayralarning o'z-o'zidan apoptozi fosfatidilserinni chiqarish orqali immunomodulyator ta'sir ko'rsatadi.Signal Transduct Target Ther.2021 yil 14 iyul;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.AGAR: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J va boshqalar.N7-Metilguanozin tRNK modifikatsiyasi onkogen mRNK tarjimasini kuchaytiradi va intrahepatik xolangiokarsinoma rivojlanishiga yordam beradi.Mol hujayra.2021 yil 29 iyul: S1097-2765 (21) 00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.AGAR: 9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y va boshqalar.Mettl14 vositachiligidagi m6A modifikatsiyasi endoplazmatik retikulum gomeostazini saqlab, jigar regeneratsiyasini osonlashtiradi.Hujayra mol gastroenterol gepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNK izolatsiyasi uchun to'plamlar boshqa namunaviy manbalarmavjud:
Hujayra, o'simlik, virus, qon va boshqalar.
RNK olinmaydi yoki RNK hosildorligi past bo'ladi
Ko'pincha tiklanish samaradorligiga turli xil omillar ta'sir qiladi, masalan: to'qima namunasidagi RNK tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.
1. Muzli hammom yoki kriyojenik (4 ° C) santrifüj operatsiya davomida amalga oshirildi.
Tavsiya: Butun jarayon davomida xona haroratida (15-25 ° C) ishlang, muzli hammom va past haroratlarda santrifüj qilmang.
2. Namunani noto'g'ri saqlash yoki ortiqcha namunani saqlash muddati.
Tavsiya: Namunalarni -80 °C haroratda saqlang yoki suyuq azotda muzlatib qo'ying va qayta-qayta muzlatish-eritishdan saqlaning;RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'qima yoki madaniyatli hujayralardan foydalanishga harakat qiling.
3. Namuna lizisining etarli emasligi.
Tavsiya: To'qimalarni homogenlashtirganda, to'qimalarning etarlicha homogenlanganligiga ishonch hosil qiling va to'qima hujayralari RNKning chiqarilishini tushuntirish uchun etarli darajada bo'linadi.
4. Eluent to'g'ri qo'shilmagan.
Tavsiya: RNase-Free ddH ekanligini tasdiqlang2O tozalash kolonnasi membranasining o'rtasiga tomchilab qo'shiladi.
5. Bufer RL2 yoki RW2 tamponiga mutlaq etanolning to'g'ri hajmi qo'shilmagan.
Tavsiya: Ko'rsatmalarga rioya qiling, to'plamni ishlatishdan oldin bufer RL2 va bufer RW2 ga to'g'ri miqdorda mutlaq etanol qo'shing va yaxshilab aralashtiring.
6. To'qima namunasi dozasi mos emas.
Tavsiya: 10-20 mg to'qima yoki (1-5) × 10 dan foydalaning6500 mkl boshiga hujayralar RL1 buferi, chunki ortiqcha to'qimalardan foydalanish RNK ekstraktsiyasini kamaytirishga olib kelishi mumkin.
7. Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq emas.
Tavsiya: Tozalash ustunining elutsiya hajmi 50-200 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH qo'shgandan keyin xona haroratini joylashtirish vaqtini uzaytirish tavsiya etiladi.2O, masalan, 5-10 daqiqa.
8.Bufer RW2 yuvishdan keyin tozalash ustunida etanol qoldig'i bor.
Tavsiya: Bufer RW2 yuvilganidan keyin etanol qoldig'i bo'lsa, 1 minut davomida bo'sh trubkani santrifüjlash, bo'sh trubkani santrifüj qilish uchun vaqtni 2 daqiqaga oshirish mumkin yoki qoldiq etanolni etarli darajada olib tashlash uchun tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqaga qo'yish mumkin.
Tozalangan RNK parchalanadi
Tozalangan RNKning sifati namunaning saqlanishi, RNazning ifloslanishi va manipulyatsiyasi va boshqalar kabi omillarga bog'liq.
1. To'qimalar namunalari o'z vaqtida saqlanmaydi.
Tavsiya: Agar to'qima namunalari yoki hujayralar yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, darhol -80 ° C yoki suyuq azotda krioservalash.RNKni ajratib olish uchun iloji boricha yangi olingan to'qima yoki hujayra namunasidan foydalaning.
2. To'qimalar namunalarini qayta-qayta muzlatish-eritish.
Tavsiya: Toʻqima namunalarini saqlashda ularni saqlash uchun kichik boʻlaklarga boʻlib kesib, namunani qayta-qayta muzlatish va RNK degradatsiyasiga yoʻl qoʻymaslik uchun ulardan foydalanganda ulardan birini olib tashlash yaxshidir.
3. RNase kiritiladi yoki operatsiya davomida bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiymaydi.
Tavsiya: RNKni ekstraksiyalash tajribalari eng yaxshisi alohida RNK manipulyatsiyasi xonalarida amalga oshiriladi va tajribadan oldin jadval tozalanadi.
Tajriba davomida RNazning kiritilishi natijasida kelib chiqqan RNK degradatsiyasini minimallashtirish uchun bir martalik qo'lqop va niqob kiying.
4. Reaktivlar foydalanish vaqtida RNase bilan ifloslangan.
Tavsiya: Tegishli tajribalar uchun yangi Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami bilan almashtiring.
5. RNK manipulyatsiyasida ishlatiladigan sentrifuga naychalari, uchlari va boshqalar RNase bilan ifloslangan.
Tavsiya: RNK ekstraktsiyasida ishlatiladigan santrifüj naychalari, uchlari, pipetkalari va boshqalarning barchasi RNazsiz ekanligini tasdiqlang.
Tozalangan olingan RNK quyi oqim tajribalariga ta'sir qiladi
Tozalash ustuni bilan tozalangan RNK, agar tuz ionlari, oqsil miqdori juda katta bo'lsa, quyi oqim tajribasiga ta'sir qiladi, masalan: teskari transkripsiya, Northern Blot va boshqalar.
1. Elutsiya qilingan RNK tuz ioni qoldiqlariga ega.
Tavsiya: RW2 tamponiga etanolning to'g'ri hajmi qo'shilganligini tasdiqlang va ish uchun ko'rsatilgan markazdan qochma tezlikda 2 ta tozalash ustunini yuving;agar tuz ioni qoldig'i bo'lsa, tozalash ustunini xona haroratida 5 daqiqa davomida RW2 Buferiga qoldiring va tuz ifloslanishini maksimal darajada olib tashlash uchun santrifüj qiling.
2. Elyusiyalangan RNKdagi etanol qoldig'i.
Tavsiya: RW2 tamponini yuvgandan so'ng, bo'sh trubkani santrifüjlash operatsiyasini ish uchun ko'rsatilgan santrifüjlash tezligida bajarishni tasdiqlang, agar etanol qoldig'i bo'lsa, bo'sh trubkani santrifugalash vaqtini 2 minutga oshiring yoki bo'sh trubkani qayta tiklash uchun uni xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.
