Cell Direct RT qPCR to'plami—SYBR GREEN I To'g'ridan-to'g'ri hujayra lizisi uchun hujayra tayyor bir bosqichli qRT-PCR to'plamlari
Tavsiflar
Ushbu to'plam RT-qPCR reaktsiyalari uchun madaniyatli hujayra namunalaridan RNKni tezda chiqarib yuborishi mumkin bo'lgan noyob lizis bufer tizimidan foydalanadi va shu bilan ko'p vaqt talab qiluvchi va mashaqqatli RNKni tozalash jarayonini yo'q qiladi.RNK shablonini atigi 7 daqiqada olish mumkin.5×To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi va 2×To'plam tomonidan taqdim etilgan to'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBR reagentlari real vaqt rejimida PCR natijalarini tez va samarali olishi mumkin.
5×To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi va 2×To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBR kuchli inhibitor tolerantligiga ega va namunalarning lizatidan to'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR uchun shablon sifatida foydalanish mumkin.Ushbu to'plam noyob RNK yuqori afinitetli Foregene teskari transkriptaza va Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTPs, MgCl ni o'z ichiga oladi.2, reaksiya buferi, PCR optimallashtiruvchisi va stabilizatori.
Texnik xususiyatlari
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
To'plam komponentlari
| I qism | Bufer CL |
| Foregene Proteaz Plus II | |
| Bufer ST | |
| II qism | DNK o'chirgich |
| 5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi | |
| 2 × To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX mos yozuvlar bo'yog'i | |
| RNazsiz ddH2O | |
| Ko'rsatmalar | |
Xususiyatlari va afzalliklari
■Oddiy va samarali: Cell Direct RT texnologiyasi yordamida RNK namunalarini atigi 7 daqiqada olish mumkin.
■ Namuna talabi kichik, 10 ta hujayrani sinab ko'rish mumkin.
■ Yuqori o'tkazuvchanlik: u 384, 96, 24, 12, 6 quduqli plastinkalarda o'stirilgan hujayralardagi RNKni tezda aniqlay oladi.
■ DNK Eraser bo'shatilgan genomlarni tezda olib tashlashi, keyingi eksperimental natijalarga ta'sirini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin.
■ Optimallashtirilgan RT va qPCR tizimi ikki bosqichli RT-PCR teskari transkripsiyasini samaraliroq va PCRni yanada aniqroq va RT-qPCR reaktsiyasi inhibitörlerine nisbatan chidamliroq qiladi.
Kit ilovasi
Qo'llash doirasi: madaniy hujayralar.
- Namuna lizisi orqali chiqarilgan RNK: faqat ushbu to'plamning RT-qPCR shabloniga tegishli.
- To'plamdan quyidagi maqsadlarda foydalanish mumkin: gen ekspressiyasini tahlil qilish, siRNK vositachiligidagi genlarni o'chirish effektini tekshirish, dori skriningi va boshqalar.
Diagramma
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plamning I qismi 4℃ haroratda saqlanishi kerak;II qism -20 ℃ da saqlanishi kerak.
Foregene Protease Plus II 4 da saqlanishi kerak℃, -20 ℃ da muzlatmang.
Reaktiv 2×To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBR -20 da saqlanishi kerak℃qorong'ida;tez-tez ishlatilsa, 4 da saqlanishi mumkin℃ qisqa muddatli saqlash uchun (10 kun ichida foydalanish).
Real Time PCR primerini loyihalash tamoyillari
Oldinga astar va teskari astar
Real Time PCR uchun primer dizayni juda muhim.Primerlar PCR kuchaytirilishining o'ziga xosligi va samaradorligi bilan bog'liq bo'lib, ular quyidagi printsiplarga asoslanib ishlab chiqilishi mumkin:
Astar uzunligi: 18-30bp.
GC tarkibi: 40-60%.
Tm qiymati: Primer 5 kabi Primer dizayn dasturi primerning Tm qiymatini berishi mumkin.Yuqori va quyi oqim primerlarining Tm qiymatlari imkon qadar yaqin bo'lishi kerak.Tm hisoblash formulasidan ham foydalanish mumkin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCRni o'tkazishda, odatda, 5 °C primer Tm qiymatidan past harorat tavlanish harorati sifatida tanlanadi (tavlanish haroratining mos kelishi PCR reaktsiyasining o'ziga xosligini oshirishi mumkin).
Primerlar va PCR mahsulotlari:
Dizayn primer PCR kuchaytirish mahsulot uzunligi afzal 100-150bp.
Shablonning ikkilamchi struktura sohasidagi dizayn astarlaridan iloji boricha qochish kerak.
Yuqori va quyi oqim primerlarining 3' uchlari o'rtasida 2 yoki undan ortiq qo'shimcha asoslar hosil bo'lishidan saqlaning.
Primer 3' terminal bazasi 3 ta qo'shimcha ketma-ket G yoki C bilan bo'lishi mumkin emas.
Primerlarning o'zlari bir-birini to'ldiruvchi tuzilmalarga ega bo'lolmaydilar, aks holda PCR kuchaytirilishiga ta'sir qiluvchi soch tolasi tuzilishi hosil bo'ladi.
ATCG primer ketma-ketlikda iloji boricha teng taqsimlanishi kerak va 3' terminal bazasi T sifatida oldini olish kerak.
1-ilova: Cell Direct RT-qPCR Kit komponentlar qoʻshimcha toʻplami
1.Hujayra lizis eritmasi
|
| |||
| To'plam komponentlari (24-quduqli liziz tizimi / quduq) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| QismI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 mkl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| QismII | DNK o'chirgich | 400 mkl | 1 ml × 2 |
2.RT aralashmasi
|
| |
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi | 800 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX mos yozuvlar bo'yog'i | 40 mkl | 200 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Yo'riqnomalar:
