(96-quduq) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR to'plami – SYBR Green I
Tavsiflar
The(96-quduq) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR to'plami-SYBR Green Iberadinoyob lizis bufer tizimito RNKni tezda chiqaradimadaniyatli hujayradanRT-qPCR reaktsiyalari uchun namunalar, ko'p vaqt talab qiluvchi va mehnatkashlarni yo'q qiladiRNKni tozalash jarayoni va kerakli RNK shablonini olish uchun atigi 7 daqiqa vaqt ketadi.The5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasiva2 × To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-SYBRqutida taqdim etilgan tez va mumkinreal vaqtda miqdoriy ma'lumotni samarali olishPCR natijalari.
5 × Direct RT Mix va 2 × Direct qPCR Mix-SYBR kuchli inhibitor bardoshlik xususiyatiga ega va samarali teskari transkripsiya va maxsus kuchaytirish uchun shablon sifatida sinovdan o'tkaziladigan namunaning lizatidan foydalanishi mumkin.Reagent tarkibida RNKga yuqori afiniteye ega bo'lgan Foregene noyob teskari transkriptaza, shuningdek, issiq D-Taq DNK polimeraza, dNTPs, MgCl mavjud.2 , reaktsiya buferi, PCR optimallashtiruvchisi va stabilizatori va namunani tez, oson va aniq aniqlash uchun lizis buferi bilan birgalikda ishlatilishi mumkin va u yuqori sezuvchanlik, kuchli o'ziga xoslik va yaxshi barqarorlik xususiyatlariga ega.
To'plam 96 quduqli ekilgan hujayralarning mikrotizimli lizisiga qaratilgan va yaxshi bir xillik va mustahkamlikka ega;to'plam komponentlari 96 ta lizis reaktsiyasini, 96 ta teskari transkripsiya reaktsiyasini va 96 × 2 qPCR reaktsiyasini ta'minlaydi, ular bir martalik foydalanish uchun 96 quduqli hujayra plastinkasiga mos kelishi mumkin, reagentlarning qayta-qayta ochilishi, muzlashi va erishi natijasida yuzaga keladigan ifloslanishni oldini oladi va reagentning ishlashini yomonlashtiradi.
To'plam komponentlari
| To'plam tarkibi ( 50 μL lizis tizimi/20 mklRT reaksiya tizimi /20μL qPCR reaktsiya tizimi) | DRT-03011 | Izoh | |
| 96T | |||
| QismI | BuferCL | 5 ml | HujayraLizis |
| ForegeneProteaz Plus II | 100 μL | ||
| BuferST | 500 μL | ||
| Qism II | DNKOʻchirgich | 100 μL | |
| 5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi | 400 μL | RT | |
| 2 × To'g'ridan-to'g'ri qPCR aralashmasi-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX mos yozuvlar bo'yog'i | 400µL | ||
| RNase- OzodddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Myillik | 1 parcha | 1 ta porsiya | |
*: Lizis reagenti DNK Eraser to'plamning II qismiga kiritilgan;Cell Lysis, RT va qPCR komponentlarini alohida sotib olish mumkin.
Xususiyatlari va afzalliklari
■Oddiy va samarali: Cell Direct RT texnologiyasi yordamida RNK namunalarini atigi 7 daqiqada olish mumkin.
■ Namuna talabi kichik, 10 ta hujayrani sinab ko'rish mumkin.
■ Yuqori o'tkazuvchanlik: u 384, 96, 24, 12, 6 quduqli plastinkalarda o'stirilgan hujayralardagi RNKni tezda aniqlay oladi.
■ DNK Eraser bo'shatilgan genomlarni tezda olib tashlashi, keyingi eksperimental natijalarga ta'sirini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin.
■ Optimallashtirilgan RT va qPCR tizimi ikki bosqichli RT-PCR teskari transkripsiyasini samaraliroq va PCRni yanada aniqroq va RT-qPCR reaktsiyasi inhibitörlerine nisbatan chidamliroq qiladi.
Kit ilovasi
Qo'llash doirasi: madaniy hujayralar.
- Namuna lizisi orqali chiqarilgan RNK: faqat ushbu to'plamning RT-qPCR shabloniga tegishli.
- To'plamdan quyidagi maqsadlarda foydalanish mumkin: gen ekspressiyasini tahlil qilish, siRNK vositachiligidagi genlarni o'chirish effektini tekshirish, dori skriningi va boshqalar.
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plamning I qismi 4 da saqlanishi kerak℃;II qism -20 ℃ da saqlanishi kerak.
Foregene Protease Plus II 4 da saqlanishi kerak℃, -20 ℃ da muzlatmang.
Reaktiv 2×To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-Taqman -20 da saqlanishi kerak℃qorong'ida;tez-tez ishlatilsa, 4 da saqlanishi mumkin℃ qisqa muddatli saqlash uchun (10 kun ichida foydalanish).
Real Time PCR primerini loyihalash tamoyillari
Oldinga astar va teskari astar
Real Time PCR uchun primer dizayni juda muhim.Primerlar PCR kuchaytirilishining o'ziga xosligi va samaradorligi bilan bog'liq bo'lib, ular quyidagi printsiplarga asoslanib ishlab chiqilishi mumkin:
- Astar uzunligi: 18-30bp.
- GC tarkibi: 40-60%.
- Tm qiymati: Primer 5 kabi Primer dizayn dasturi primerning Tm qiymatini berishi mumkin.Yuqori va quyi oqim primerlarining Tm qiymatlari imkon qadar yaqin bo'lishi kerak.Tm hisoblash formulasidan ham foydalanish mumkin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCRni o'tkazishda, odatda, 5 °C primer Tm qiymatidan past harorat tavlanish harorati sifatida tanlanadi (tavlanish haroratining mos kelishi PCR reaktsiyasining o'ziga xosligini oshirishi mumkin).
- Primerlar va PCR mahsulotlari:
- Dizayn primer PCR kuchaytirish mahsulot uzunligi afzal 100-150bp.
- Shablonning ikkilamchi struktura sohasidagi dizayn astarlaridan iloji boricha qochish kerak.
- Yuqori va quyi oqim primerlarining 3' uchlari o'rtasida 2 yoki undan ortiq qo'shimcha asoslar hosil bo'lishidan saqlaning.
- Primer 3' terminal bazasi 3 ta qo'shimcha ketma-ket G yoki C bilan bo'lishi mumkin emas.
- Primerlarning o'zlari bir-birini to'ldiruvchi tuzilmalarga ega bo'lolmaydilar, aks holda PCR kuchaytirilishiga ta'sir qiluvchi soch tolasi tuzilishi hosil bo'ladi.
- ATCG primer ketma-ketlikda iloji boricha teng taqsimlanishi kerak va 3' terminal bazasi T sifatida oldini olish kerak.
Ilova1:Cell DirectRT-qPCR Komponent to'plamit qo'shimchalar to'plami
1. Hujayra lizis eritmasi
| Hujayra lizis eritmasi | |||
| To'plam komponentlari (24-quduqli liziz tizimi / quduq) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| QismI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 mkl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| QismII | DNK o'chirgich | 400 mkl | 1 ml × 2 |
| RT aralashmasi | |
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi | 800 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR aralashmasi | ||
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX mos yozuvlar bo‘yog‘i | 40 mkl | 200 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Yo'riqnomalar:
