To'g'ridan-to'g'ri hujayra RT qPCR to'plami - Taqman to'g'ridan-to'g'ri hujayra lizisi uchun hujayra tayyor bir bosqichli qRT-PCR to'plamlari probi
Tavsiflar
Ushbu mahsulot RT-qPCR reaktsiyalari uchun kulturali hujayra namunalaridan RNKni tezda chiqarish uchun noyob lizis bufer tizimidan foydalanadi, bu ko'p vaqt talab qiluvchi va mashaqqatli RNKni tozalash jarayonini bartaraf qiladi va kerakli RNK shablonini olish uchun bor-yo'g'i 7 daqiqa vaqt sarflaydi.
5 × Direct RT Mix va 2 × Direct qPCR Mix-Taqman kuchli inhibitor bardoshliligiga ega va shablon sifatida o'lchanadigan namunaning lizatidan foydalangan holda samarali teskari va maxsus kuchaytirishni amalga oshirishi mumkin.Reagent tarkibida Foregene teskari transkriptaza, issiq D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl mavjud.2, Reaktsiya buferi, PCR optimallashtiruvchisi va stabilizatori, bu namunalarni tez va oson aniqlash uchun lizis buferi bilan ishlatilishi mumkin va yuqori sezuvchanlik, o'ziga xoslik va barqarorlik xususiyatlariga ega.
Texnik xususiyatlari
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
To'plam komponentlari
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| To'plam komponentlari 20ml qPCR reaktsiya tizimi | DRT-01021 | DRT-01022 | Eslatma | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Qism I | Bufer CL | 4 ml | 20 ml | Hujayra lizisi |
| Foregene Proteaz Plus II | 80 mkl | 400 mkl | ||
| Bufer ST | 400 mkl | 1 ml × 2 | ||
|
Qism II | DNK o'chirgich | 80 mkl | 400 mkl | |
| 5 × Direct RT Mix * | 160 mkl | 800 mkl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX mos yozuvlar bo'yog'i | 40 mkl | 200 mkl | ||
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Qo'llanma | 1 dona | 1 dona | ||
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqmanni alohida sotib olish mumkin
Xususiyatlari va afzalliklari
■Oddiy va samarali: Cell Direct RT texnologiyasi yordamida RNK namunalarini atigi 7 daqiqada olish mumkin.
■ Namuna talabi kichik, 10 ta hujayrani sinab ko'rish mumkin.
■ Yuqori o'tkazuvchanlik: u 384, 96, 24, 12, 6 quduqli plastinkalarda o'stirilgan hujayralardagi RNKni tezda aniqlay oladi.
■ DNK Eraser bo'shatilgan genomlarni tezda olib tashlashi, keyingi eksperimental natijalarga ta'sirini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin.
■ Optimallashtirilgan RT va qPCR tizimi ikki bosqichli RT-PCR teskari transkripsiyasini samaraliroq va PCRni yanada aniqroq va RT-qPCR reaktsiyasi inhibitörlerine nisbatan chidamliroq qiladi.
Kit ilovasi
Qo'llash doirasi: madaniy hujayralar.
- Namuna lizisi orqali chiqarilgan RNK: faqat ushbu to'plamning RT-qPCR shabloniga tegishli.
- To'plamdan quyidagi maqsadlarda foydalanish mumkin: gen ekspressiyasini tahlil qilish, siRNK vositachiligidagi genlarni o'chirish effektini tekshirish, dori skriningi va boshqalar.
Saqlash va saqlash muddati
Ushbu to'plamning I qismi 4 da saqlanishi kerak℃;II qism -20 ℃ da saqlanishi kerak.
Foregene Protease Plus II 4 da saqlanishi kerak℃, -20 ℃ da muzlatmang.
Reaktiv 2×To'g'ridan-to'g'ri qPCR Mix-Taqman -20 da saqlanishi kerak℃qorong'ida;tez-tez ishlatilsa, 4 da saqlanishi mumkin℃ qisqa muddatli saqlash uchun (10 kun ichida foydalanish).
Real Time PCR primerini loyihalash tamoyillari
Oldinga astar va teskari astar
Real Time PCR uchun primer dizayni juda muhim.Primerlar PCR kuchaytirilishining o'ziga xosligi va samaradorligi bilan bog'liq bo'lib, ular quyidagi printsiplarga asoslanib ishlab chiqilishi mumkin:
- Astar uzunligi: 18-30bp.
- GC tarkibi: 40-60%.
- Tm qiymati: Primer 5 kabi Primer dizayn dasturi primerning Tm qiymatini berishi mumkin.Yuqori va quyi oqim primerlarining Tm qiymatlari imkon qadar yaqin bo'lishi kerak.Tm hisoblash formulasidan ham foydalanish mumkin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCRni o'tkazishda, odatda, 5 °C primer Tm qiymatidan past harorat tavlanish harorati sifatida tanlanadi (tavlanish haroratining mos kelishi PCR reaktsiyasining o'ziga xosligini oshirishi mumkin).
- Primerlar va PCR mahsulotlari:
- Dizayn primer PCR kuchaytirish mahsulot uzunligi afzal 100-150bp.
- Shablonning ikkilamchi struktura sohasidagi dizayn astarlaridan iloji boricha qochish kerak.
- Yuqori va quyi oqim primerlarining 3' uchlari o'rtasida 2 yoki undan ortiq qo'shimcha asoslar hosil bo'lishidan saqlaning.
- Primer 3' terminal bazasi 3 ta qo'shimcha ketma-ket G yoki C bilan bo'lishi mumkin emas.
- Primerlarning o'zlari bir-birini to'ldiruvchi tuzilmalarga ega bo'lolmaydilar, aks holda PCR kuchaytirilishiga ta'sir qiluvchi soch tolasi tuzilishi hosil bo'ladi.
- ATCG primer ketma-ketlikda iloji boricha teng taqsimlanishi kerak va 3' terminal bazasi T sifatida oldini olish kerak.
Ilova1:Cell DirectRT-qPCR Komponent to'plamit qo'shimchalar to'plami
1. Hujayra lizis eritmasi
| Hujayra lizis eritmasi | |||
| To'plam komponentlari (24-quduqli liziz tizimi / quduq) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| QismI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 mkl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| QismII | DNK o'chirgich | 400 mkl | 1 ml × 2 |
| RT aralashmasi | |
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × To'g'ridan-to'g'ri RT aralashmasi | 800 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR aralashmasi | ||
| To'plam komponentlari (20 mkl reaktsiya tizimi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX mos yozuvlar bo‘yog‘i | 40 mkl | 200 mkl |
| RNazsiz ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Yo'riqnomalar:
