A260/A230 ning past nisbati odatda 230nm maksimal assimilyatsiya to'lqin uzunligiga ega bo'lgan aralashmalar tufayli yuzaga keladi.Keling, ushbu iflosliklar nimadan iboratligini ko'rib chiqaylik:

• Umumiy ifloslantiruvchi moddalar	Absorbtsiya to'lqin uzunligi	Nisbat effekti
  Protein	~230nm va 280nm	Bir vaqtning o'zida A ni kamaytirish260/A 280va A260/A 280nisbatlar
  Guanidin tuzi	220-240 nm	A ni kamaytiring260/A 280nisbat
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm va 270nm	A ni kamaytiring260/A 280nisbat
  EDTA	~230nm	A ni kamaytiring260/A 280nisbat
  etanol	230-240 nm	A ni kamaytiring260/A 280nisbat

 
 
 
Umumiy ifloslantiruvchi moddalarning yutilish to'lqin uzunligi va kontrast qiymati

Protein bilan ifloslanish
Proteinning ifloslanishi nuklein kislotasini olish jarayonida eng keng tarqalgan ifloslanish sifatida qaralishi mumkin.Protein yuqori suvli faza va pastki faza o'rtasida mavjudorganikbosqichi.Ifloslanish bir vaqtning o'zida A260/A280 va A260/A230 nisbatlarini kamaytiradi va A260/A230 nisbati A260/A280 nisbatidan aniqroq o'zgaradi.
Keyingi davrdateskari transkripsiyaor qPCR reaktsiyalari, oqsil qoldiqlari ferment funktsiyasini inhibe qilishi yoki xalaqit berishi mumkin.Protein bilan ifloslanishning oldini olishning eng yaxshi usuli - supernatantni aspiratsiya qilishda "ko'proq emas, balki oz miqdorda ko'p marta" tamoyilini yodda tutishdir.

2. Guanidin bilan ifloslanish
gidroxlorid (GuHCl) va guanidin tiosiyanat (GTC) oqsillarni denaturatsiya qilish ta'siriga ega bo'lib, ular nuklein kislotasi ekstraktsiyasi jarayonida hujayra membranalarini tezda yo'q qiladi, oqsil denatüratsiyasi va cho'kishiga olib keladi.GuHCl va GTC ning yutilish to'lqin uzunligi 220-240 nm orasida vaqoldiq guanidiniy tuzi A260/A230 nisbatini kamaytiradi.Qoldiq guanidiniy tuzi nisbatni pasaytirsa ham,quyi oqimdagi tajribalarga ta'siri aslida ahamiyatsiz.

3. Trizol bilan zaharlanish
Trizolning asosiy komponenti fenoldir.Fenolning asosiy vazifasi hujayralarni parchalash va hujayralardagi oqsillar va nuklein kislota moddalarini chiqarishdir.Fenol oqsillarni samarali ravishda denatüratsiya qilishi mumkin bo'lsa-da, u RNaz faolligini to'liq inhibe qila olmaydi.Shuning uchun endogen va ekzogen RNazni inhibe qilish uchun TRIzolga 8-gidroksixinolin, guanidin izotiyosiyanat, b-merkaptoetanol va boshqalar qo'shiladi.
Uyali RNKni ekstraksiya qilishda Trizol hujayralarni tezda lizinglashi va hujayralardan chiqarilgan nukleazani inhibe qilishi mumkin va Trizol qoldiqlari A260 / A230 nisbatini sezilarli darajada kamaytiradi.
Qayta ishlash usuli: Santrifüjlashda shuni ta'kidlash kerakki, Trizol tarkibidagi fenol 4 ° va xona haroratida suv fazasida oson eriydi.

4. Etanol qoldig'i
Etanol oxirgi jarayonda DNK bilan bog'lanishi mumkin bo'lgan tuz ionlarini eritishda DNKni cho'ktirish uchun ishlatiladi.Eng yuqori yutilish to'lqin uzunligining yutilish cho'qqisietanol ham 230-240 nm, bushuningdek, A260/A230 nisbatlarini kamaytiradi.
Etanol qoldig'ining oldini olish usuli oxirgi elutsiya paytida ikki marta takrorlanishi mumkintutun qopqog'iElyusiya uchun tampon qo'shishdan oldin etanol to'liq bug'lanishi uchun ikki daqiqa davomida.
Biroq, bu nisbat faqat RNK sifatini baholash ko'rsatkichi ekanligini bilish kerak.Agar yuqorida qayd etilgan operatsiyalar qat'iy tartibga solinsa, nisbat va standart diapazon o'rtasidagi og'ish quyi oqimdagi tajribalarga katta ta'sir ko'rsatmaydi.
Tegishli mahsulotlar:
Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami
O'simliklarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami
Hujayra umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami
O'simlik umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami Plus