Bukkal tampon/FTA kartasi DNK izolatsiyasi to'plami. Bukkal tamponlardan genomik DNK ekstraktsiyasi yoki tozalash to'plami
To'plam tavsifi:
Bukkal tampon/FTA karta namunalaridan yuqori sifatli genomik DNKni tezda tozalang.
◮RNaz bilan ifloslanish yo'q:To'plam tomonidan taqdim etilgan Faqat DNK ustuni tajriba davomida RNaz qo'shmasdan RNKni genomik DNKdan olib tashlash imkonini beradi va laboratoriyani ekzogen RNase bilan ifloslanishining oldini oladi.
◮Tez tezlik:Foregene Protease shunga o'xshash proteazlarga qaraganda yuqori faollikka ega va to'qimalar namunalarini tezda hazm qiladi;operatsiya oddiy va genomik DNK ekstraktsiyasi operatsiyasi 20-80 daqiqada yakunlanishi mumkin.
◮Qulay:Santrifüjlash xona haroratida amalga oshiriladi va 4 ° C past haroratli santrifüj yoki DNKning etanol cho'ktirilishiga hojat yo'q.
◮Xavfsizlik:Organik reagent ekstraktsiyasi talab qilinmaydi.
◮Yuqori sifatli:Chiqarilgan genomik DNK katta fragmentlarga ega, RNK yo'q, RNaz yo'q va ion miqdori juda past bo'lib, ular turli tajribalar talablariga javob bera oladi.
◮Mikroelutsiya tizimi:Bu quyi oqimni aniqlash yoki tajriba uchun qulay bo'lgan genomik DNK kontsentratsiyasini oshirishi mumkin.
Tavsif
Ushbu to'plam bukkal tamponlar va FTA kartasidan (qon dog'lari) yuqori konsentratsiyali genomik DNKni olishning samarali va tezkor usulini taqdim etadi.Bizning kompaniyamizdan foydalanish's noyob DNK-faqat kremniy membrana spin ustuni va formulasi, Foregene Protease bilan birgalikda yuqori konsentratsiyali, yuqori sifatli genomik DNKni 80 daqiqada ajratib olish mumkin.Maxsus ishlab chiqilgan kichik tozalash ustuni genomik DNKni bog'laydi va DNKni oz miqdorda tozalash mumkin (Olingan genomik DNK kontsentratsiyasini oshirish uchun 15ml) elutsiya tizimi, bu quyi oqimni aniqlash yoki tajriba uchun qulay.To'plam bir vaqtning o'zida bir yoki bir nechta namunani qayta ishlay oladi va tozalash jarayoni fenol, xloroform va ko'p vaqt talab qiluvchi izopropanol yoki etanol cho'kmasi kabi organik moddalarning ekstraktsiyasini talab qilmaydi va operatsiya oddiy va vaqtni tejaydi.
Texnik xususiyatlari
50 tayyorgarlik
To'plam komponentlari
| ST1 buferi |
| ST2 buferi |
| Chiziqli akrilamid |
| Bufer PW |
| Bufer WB |
| Bufer EB |
| Forgen proteaz |
| Faqat DNK ustuni |
| Ko'rsatmalar |
Xususiyatlari va afzalliklari
-RNaz bilan ifloslanish yo'q: To'plam tomonidan taqdim etilgan Faqat DNK ustuni tajriba davomida RNaz qo'shmasdan RNKni genomik DNKdan olib tashlash imkonini beradi va laboratoriya ekzogen RNase bilan ifloslanishini oldini oladi.
-Tez tezlik: Foregene Protease shunga o'xshash proteazlarga qaraganda yuqori faollikka ega, namunalarni tez hazm qiladi;oddiy operatsiya.
- Qulay: Santrifüj xona haroratida amalga oshiriladi va 4 ° C past haroratli santrifüj yoki DNKning etanol cho'ktirilishiga hojat yo'q.
-Xavfsizlik: Organik reagent ekstraktsiyasi talab qilinmaydi.
-Yuqori sifat: Ekstraksiya qilingan genomik DNK katta bo'laklarga ega, RNK yo'q, RNaz yo'q va turli xil tajribalar talablariga javob beradigan juda past ion tarkibiga ega.
-Mikro-elutsiya tizimi: u quyi oqimni aniqlash yoki tajriba uchun qulay bo'lgan genomik DNK kontsentratsiyasini oshirishi mumkin.
Kit ilovasi
Quyidagi namunalardan genomik DNKni tozalash uchun javob beradi: bukkal tamponlar, FTA kartasi (qon dog'lari).
Saqlash va saqlash muddati
-Ushbu to'plam quruq sharoitda xona haroratida (15-25°C) 12 oy davomida saqlanishi mumkin;agar uni uzoqroq vaqt davomida saqlash kerak bo'lsa, uni 2-8 ° S haroratda saqlash mumkin.
Eslatma: Agar past haroratda saqlansa, eritma yog'ingarchilikka moyil bo'ladi.Ishlatishdan oldin, eritmani xona haroratida ma'lum vaqt davomida to'plamga qo'yishni unutmang.Agar kerak bo'lsa, cho'kmani eritib olish uchun uni 37 ° C suv hammomida 10 daqiqa davomida oldindan qizdiring va ishlatishdan oldin aralashtiring.
-Foregene Protease eritmasi o'ziga xos formulaga ega, u xona haroratida uzoq vaqt (3 oy) saqlanganida faol bo'ladi;uning faolligi va barqarorligi 4 ° C da saqlanganda yaxshiroq bo'ladi, shuning uchun uni 4 ° C da saqlash tavsiya etiladi, uni -20 ° C da saqlamaslikni unutmang.
Tozalash ustuni tiqilib qolgan
Ushbu to'plamda genomik DNK ekstraktsiyasi operatsiyasida tozalash ustuni to'g'ridan-to'g'ri namunaning fermentativ lizis aralashmasiga santrifüjlash bosqichisiz adsorbsiyalanadi va tozalash ustuni to'liq fermentizatsiya qilinmaganligi va namunaning yuqori viskozitesi tufayli bloklanishi mumkin.
Quyidagi mumkin bo'lgan sabablar:
1. To'qimalar namunalarining to'liq bo'lmagan fermentativ hazm bo'lishi.
Tavsiya: Foregene Protease namunasini qayta ishlash muddati mos ravishda uzaytirilishi mumkin yoki supernatant 12000 rpm (~13400 × g) da 5 daqiqa davomida santrifüjlangandan keyin olinishi mumkin.
2. To'qimalar namunalaridan yoki katta to'qimalardan ortiqcha foydalanish.
Tavsiya: Namunada 1 Bukkal tampondan oshmasligi yaxshidir;agar namuna juda katta bo'lsa, ST1 Buffer, Foregene Protease, ST2 buferining dozasini mos ravishda oshiring.
3. Namuna viskozitesi juda yuqori.
Tavsiya: Genomik DNK ekstraktsiyasidan oldin namunalar 10 mM Tris-HCl bilan mos ravishda suyultirilishi mumkin.
4. Qon kartasining bo'laklari so'rilgan.
Tavsiya: Qon dog'ini (FTA Card) genomik ekstraktsiyasining 6-bosqichining vaqtinchalik santrifüj vaqti tegishli ravishda uzaytirilishi mumkin.
Past rentabellik yoki DNK yo'qligi
Ko'pincha genomik DNK hosildorligiga ta'sir qiluvchi turli omillar mavjud, jumladan, namunaning kelib chiqishi, namunani saqlash shartlari, namunani tayyorlash, manipulyatsiya va boshqalar.
Ekstraksiya paytida genomik DNKni olish mumkin emas
Mumkin bo'lgan sabablar quyidagilar:
1. Namunalarni noto'g'ri saqlash yoki juda uzoq vaqt saqlash genomik DNK degradatsiyasiga olib keladi.
Tavsiya: Og'iz bo'shlig'i tamponlaridan yangi namuna olish kerak va genomik DNK ekstraktsiyasi uchun konservalangan tamponlardan foydalanish tavsiya etilmaydi;qon dog'lari namunalari sifatning malakali bo'lishini ta'minlashi va saqlash muddati juda uzoq bo'lmasligi kerak.
2. To'qimalardan juda kam foydalanish mos keladigan genomik DNKning ekstraktsiyasiga olib kelishi mumkin.
Tavsiya: Operatsiya qoʻllanmasida koʻrsatilgan bukkal tampondan namuna olish yoʻriqnomasiga amal qiling va genomik DNK ekstraktsiyasi uchun ogʻiz tamponiga yetarlicha hujayralar biriktirilishi uchun imkon qadar koʻp marta artib oling;qon dog'i namunasini olish uchun qon dog'ini kesish maydoni mos ravishda oshirilishi mumkin.
3. Foregene Proteaz noto'g'ri saqlanadi, natijada uning faolligi yoki inaktivatsiyasi kamayadi.
Tavsiya: Foregene Proteazni saqlash shartlarini tasdiqlang yoki uni fermentativ reaksiya uchun yangi Foregene Proteaz bilan almashtiring.
4. To'plamning noto'g'ri saqlanishi yoki saqlash muddati juda uzoq, natijada to'plamdagi ba'zi komponentlar ishdan chiqadi.
Tavsiya: Tegishli protseduralar uchun yangi Bukkal tampon DNK izolyatsiyasi to'plamini sotib oling.
5. Bufer WB mutlaq etanolni qo'shmaydi.
Tavsiya: Bufer WB mutlaq etanolning to'g'ri hajmini qo'shishini tasdiqlang.
6. Silikon plyonkaga eluent to'g'ri qo'shilmagan.
Tavsiya: Silikon membrananing o'rtasiga 65 °C oldindan qizdirilgan eluent tomchilarini qo'shing va elutsiya samaradorligini oshirish uchun xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.
Izolyatsiya qilingan past rentabellikli genomik DNK
Quyidagi mumkin bo'lgan sabablar:
1. Namunalarni noto'g'ri saqlash yoki juda uzoq vaqt saqlash genomik DNK degradatsiyasiga olib keladi.
Tavsiya: Og'iz bo'shlig'idan olingan tamponlar yangi namuna olingan va konservalangan tamponlardan genomik DNK ekstraktsiyasi uchun foydalanilmasligi kerak.
2. Agar to'qima namunasi miqdori juda kichik bo'lsa, olingan genomik DNK tarkibi kamroq bo'ladi.
Tavsiya: Genomik DNK ekstraktsiyasi uchun og'iz bo'shlig'iga yetarlicha hujayralar biriktirilishi uchun imkon qadar ko'p marta artib, operatsiya yo'riqnomasidagi og'iz tamponlaridan namuna olish ko'rsatmalariga amal qiling.
3. Foregene Proteaz noto'g'ri saqlanadi, natijada uning faolligi yoki inaktivatsiyasi kamayadi.
Tavsiya: Foregene Proteazni saqlash shartlarini tasdiqlang yoki uni fermentativ reaksiya uchun yangi Foregene Proteaz bilan almashtiring.
4. Eluent masalalari.
Tavsiya: Elyusiya uchun Buffer EB dan foydalaning;agar ddH dan foydalansangiz2O yoki boshqa eluentlar, elyuatning pH qiymati 7,0-8,5 orasida ekanligini tasdiqlang.
5. Eluat tomchilab to'g'ri qo'shilmagan.
Tavsiya: Silikon membrananing o'rtasiga eluent tomchilarini qo'shing va tozalash samaradorligini oshirish uchun xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.
6. Elutsiya suyuqligi juda kam to'planadi.
Tavsiya: Yo'riqnomada talab qilinganidek, genomik DNKni elutsiya qilish uchun kamida 15 mkl dan kam bo'lmagan holda elyuentdan foydalaning.
Izolyatsiya qilingan genomik DNKning past tozaligi
Past genomik DNK sofligi quyi oqimdagi tajribalarning muvaffaqiyatsizligi yoki qoniqarsiz natijalariga olib kelishi mumkin, masalan: fermentlarni kesib bo'lmaydi, PCR qiziqtiradigan gen fragmentini ololmaydi va hokazo.
Mumkin bo'lgan sabablar quyidagilar:
1. Geteroproteinlarning ifloslanishi, RNKning ifloslanishi.
Tahlil: tozalash ustuni Buffer PW yordamida yuvilmagan;Buffer PW yuvish tozalash ustuni to'g'ri markazdan qochma tezligi yordamida yuvilmagan.
Tavsiya: Etanol qo'shishdan oldin supernatantda yog'ingarchilik yo'qligiga ishonch hosil qiling;tozalash ustunini ko'rsatmalarga muvofiq yuvishingizga ishonch hosil qiling va bu bosqichni o'tkazib yuborish mumkin emas.
2. Nopoklik ionlari bilan ifloslanishi.
Tahlil: Bufer WB yuvish tozalash ustuni o'tkazib yuborildi yoki faqat bir marta yuvildi, natijada qoldiq ionli ifloslanish paydo bo'ldi.
Tavsiya: Qolgan ionlarni iloji boricha olib tashlash uchun Buffer WB ni ko'rsatilgandek 2 marta yuvishni unutmang.
3. RNK fermenti bilan ifloslanish.
Tahlil: Xorijiy RNases buferga qo'shildi;Bufer PW yuvish operatsiyasi noto'g'ri edi, natijada RNase qoldiqlari paydo bo'ldi, bu esa quyi oqimdagi RNK eksperimental operatsiyalariga, masalan, in vitro transkripsiyasiga ta'sir qiladi.
Tavsiya: Foregene seriyali nuklein kislotasi izolyatsiyasi to'plamlari RNKni qo'shimcha RNase qo'shmasdan olib tashlashi mumkin, shuning uchun bukkal Swab/FTA Card DNK izolyatsiyasi to'plamiga RNase qo'shilishi shart emas;Bufer PW yuvish tozalash ustuni uchun ko'rsatmalarga rioya qiling va bu bosqichni o'tkazib yuborib bo'lmaydi.
4. Etanol qoldig'i.
Tahlil: Bufer WB tozalash ustunini yuvgandan so'ng bo'sh trubkani santrifüj qilishni amalga oshirmadi.
Tavsiya: Ko'rsatmalarga muvofiq bo'sh trubkani to'g'ri santrifüjlash operatsiyasini bajaring.
5. Boshqa nopoklik ifloslanishi.
Tahlil: Saqlangan namunalar yoki maxsus namunalar oldindan ishlov berilmaydi.
Tavsiya: Namunani ko'rsatmalarga muvofiq yaxshilab oldindan davolang.
