Muammolarni tahlil qilish uchun qo'llanmalar

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Hech qanday RNK ajratib bo'lmaydi yoki nuklein kislotaning unumi past bo'ladi

Odatda qayta tiklash samaradorligiga ta'sir qiluvchi ko'plab omillar mavjud, masalan: namunadagi RNK tarkibi, ishlash usuli, elutsiya hajmi va boshqalar.

Umumiy sabablarni tahlil qilish:

1.Muzli hammom yoki ish paytida past haroratli (4 ° C) santrifüj.

Taklif: Xona haroratida (15-25 ° C) ishlash, hech qachon muzli hammom va past haroratli santrifüj.

2. Namunani noto'g'ri saqlash yoki namunani juda uzoq vaqt saqlash.

Taklif: Namunalarni -80 ° C da saqlang yoki suyuq azotda muzlatib qo'ying va qayta-qayta muzlatish-eritishdan saqlaning;RNK ekstraktsiyasi uchun yangi to'plangan namunalardan foydalanishga harakat qiling.

3. Namuna lizisining yetarli emasligi

Tavsiya: Iltimos, namuna va ishchi eritma (chiziqli akrilamid) yaxshilab aralashtirilganligiga va xona haroratida (15-25 ° C) 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilinganligiga ishonch hosil qiling.

4.Eluent noto'g'ri qo'shilgan

Tavsiya: RNase-Free ddH2O tozalash ustuni membranasining o'rtasiga qo'shilganligiga ishonch hosil qiling.

5. viRW2 tamponidagi suvsiz etanolning noto'g'ri hajmi

Taklif: Iltimos, ko'rsatmalarga rioya qiling, to'plamni ishlatishdan oldin viRW2 tamponiga suvsiz etanolning to'g'ri hajmini qo'shing va yaxshilab aralashtiring.

6.Noto'g'ri namunadan foydalanish.

Taklif: 500 mkl Bufer viRL uchun 200 µl namuna.Haddan tashqari namuna hajmi RNK ekstraktsiya tezligining pasayishiga olib keladi.

7.Noto'g'ri elyusiya hajmi yoki to'liq bo'lmagan elyusiya.

Taklif: tozalash ustunining eluent hajmi 30-50 mkl;agar elüsyon effekti qoniqarli bo'lmasa, oldindan qizdirilgan RNase-Free ddH qo'shish tavsiya etiladi.₂O va xona haroratida joylashtirish vaqtini uzaytiring, masalan, 5-10 min

8.Purifikatsiya ustunida viRW2 tamponida yuvilgandan keyin etanol qoldig'i bor.

Taklif: Agar viRW2 tamponida yuvilgandan va 2 daqiqa davomida bo'sh trubkada santrifüjlangandan keyin ham etanol qolsa, qolgan etanolni to'liq olib tashlash uchun tozalash ustuni bo'sh trubkada santrifüj qilinganidan keyin xona haroratida 5 daqiqa davomida qoldirilishi mumkin.

Tozalangan RNK molekulalarining parchalanishi

Tozalangan RNKning sifati namunani saqlash, RNase ifloslanishi va ishlash kabi omillarga bog'liq.

Umumiy sabablarni tahlil qilish:

1.Yig'ilgan namunalar o'z vaqtida saqlanmagan.

Taklif: Agar namuna yig'ilgandan keyin o'z vaqtida ishlatilmasa, uni darhol -80 ℃ yoki suyuq azotda saqlang.RNK molekulalarini olish uchun iloji boricha yangi to'plangan namunalardan foydalanishga harakat qiling.

2.To'plangan namunalar qayta-qayta muzlab, eritildi.

Taklif: Namuna olish va saqlash vaqtida qayta-qayta muzlatish va eritishdan (bir martadan ko'p bo'lmagan) saqlaning, aks holda nuklein kislotaning unumi kamayadi.

3.RNase operatsiya xonasida kiritilgan yoki bir martalik qo'lqoplar, niqoblar va boshqalar kiymagan.

Taklif: RNK molekulalarining eksperimenti alohida RNK operatsiya xonasida eng yaxshi tarzda amalga oshiriladi va tajriba stoli tajribadan oldin tozalanadi.Tajriba davomida RNazning kiritilishi natijasida RNK degradatsiyasini oldini olish uchun bir martalik qo'lqop va niqob kiying.

4.Reagent foydalanish paytida RNase bilan ifloslangan.

Taklif: Tegishli tajribalar uchun yangi Virusli RNK izolyatsiyasi to'plami bilan almashtiring.

5.Sentrifuga naychalari, pipetka uchlari va boshqalarning RNase bilan ifloslanishi. Taklif: Santrifuga naychalari, pipetka uchlari va pipetkalarning barchasi RNasesiz ekanligiga ishonch hosil qiling.

Tozalangan RNK molekulalari quyi oqimdagi tajribalarga ta'sir qildi

Tozalash ustuni tomonidan tozalangan RNK molekulalari, agar juda ko'p tuz ionlari yoki oqsillar mavjud bo'lsa, quyi oqim tajribalariga ta'sir qiladi, masalan: teskari transkripsiya, Northern Blot va boshqalar.

1.Elutsiya qilingan RNK molekulalarida qolgan tuz ionlari mavjud.

Tavsiya: viRW2 tamponiga suvsiz etanolning to'g'ri hajmi qo'shilganligiga ishonch hosil qiling va tozalash ustunini ishlatish yo'riqnomasida ko'rsatilgan to'g'ri santrifüj tezligiga ko'ra ikki marta yuving; Agar tuz ionlari qolgan bo'lsa, tozalash ustuniga viRW2 tamponini qo'shib, xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring.Keyin tuz ionlari ifloslanishini eng katta darajada olib tashlash uchun santrifüj qiling

2.Elutsiya qilingan RNK molekulalarida etanol qolgan

Taklif: tozalash ustunlari bufer viRW2 bilan yuvilganligini tasdiqlaganingizdan so'ng, foydalanish yo'riqnomasida ko'rsatilgan markazdan qochma tezligiga muvofiq bo'sh trubkalarda santrifüj qiling.Agar hali ham etanol qolgan bo'lsa, qolgan etanolni maksimal darajada olib tashlash uchun bo'sh trubkada santrifüj qilingandan so'ng uni xona haroratida 5 daqiqaga qoldirish mumkin.

Yo'riqnomalar:

Virusli RNK izolyatsiyasi to'plami bo'yicha qo'llanma