To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami II
To'plam tavsifi:
◮To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami, Foregene tomonidan ishlab chiqilgan Foreasy Reverse Transkriptaza va Foreasy HS Taq DNK Polimerazidan foydalangan holda, noyob reaksiya buferi bilan ushbu to'plamni kuchli qarshilik va moslik bilan yaratadi va u to'g'ridan-to'g'ri reaktsiya yordamida Foregene Lysis tizimini shablon sifatida sinab ko'rishi mumkin.Ushbu to'plam COVID-19 nuklein kislotasini aniqlash to'plami va boshqa patogen bakteriyalar nuklein kislotasini aniqlash to'plamini ishlab chiqish uchun qo'llanilishi mumkin.
Tavsif
To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami alohida paketlangan RT-qPCR buferini, yuqori samarali Foreasy HS Taq DNK polimerazasini taqdim etadi.va Foreasy teskari transkriptaza (MMLV),oddiy tekshirish doirasida orqa to'plamlarni yaratish va tizimni sozlash uchun qulay qilish.
To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami, Foregene tomonidan ishlab chiqilgan Foreasy Reverse Transkriptaza va Foreasy HS Taq DNK Polimerazidan foydalangan holda, noyob reaksiya buferi bilan ushbu to'plamni kuchli qarshilik va moslik bilan yaratadi va u to'g'ridan-to'g'ri reaktsiya yordamida Foregene Lysis tizimini shablon sifatida sinab ko'rishi mumkin.Ushbu to'plam COVID-19 nuklein kislotasini aniqlash to'plami va boshqa patogen bakteriyalar nuklein kislotasini aniqlash to'plamini ishlab chiqish uchun qo'llanilishi mumkin.
Ushbu to'plam to'g'ridan-to'g'ri IVD mahsulotining tarkibiy qismi bo'lishi mumkin, bu oson va tezdir.Uni qayta ishlab chiqmasdan, faqat oson tekshirish kerak.
Texnik xususiyatlari
500T, 50000T
To'plam komponentlari
| To'plam tarkibi (20 mL reaktsiya tizimi) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Xayolparast Rteskari transkriptaza (200 U/μL) | 50 mkl×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNK polimeraza (5 U/μL) | 100 mkl×1 | 1 ml×10 |
| 2 × To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCRBufer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Ko'rsatma | 1 | 1 |
Operatsion bosqichlari
Javob: Shablon va reaktivni tayyorlang
1. Tayyorlangan RNK shablonini (RNK shablonini ajratib olish va tozalash uchun Foregene Total RNK Isolation Kit seriyali to'plamidan foydalanish tavsiya etiladi) yoki namunali kreking mahsulotini (Foregene Lysis tizimidan foydalanish tavsiya etiladi), maxsus primerlarni (10 mkM) va boshqa tegishli sarf materiallarini, asbobni tayyorlang.
2. 2× Direct RT-qPCR buferi, RNase-Free ddH2O va 20× ROX Reference Dye (agar kerak bo'lsa) muz bilan qutiga soling, ularni tabiiy ravishda eritib, muloyimlik bilan aralashtiring.
B: RT-qPCR tizimini tayyorlang
Reaksiya tizimining reaksiya buferi hajmining yarmini oling (masalan, tizim hajmi 20 mkL bo'lsa, u 10 mkL 2 × Direct RT-qPCR buferini olishi kerak)). Uchunmos keladigan ferment miqdori, shuni taklif qilamizM-MLV: 10-30 U/20 mL reaktsiya tizimi,TaqDNK polimeraza:1-2 U/20 mL reaktsiya tizimibu bizning taklifimiz, siz uni sinab ko'rishingiz va sozlashingiz kerak), RNK shablonini, maxsus primerlarni va problarni qo'shing va RNase-Free ddH qo'shing2O dan 20 mkL gacha.RT-qPCR reaktsiya tizimining maxsus tayyorgarligi quyidagi 1-jadvalda ko'rsatilishi mumkin.
1-jadval: RT-qPCR tizimini tayyorlang
| Komponent | Hajmi | Yakuniy konsentratsiya |
| 2 × To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR buferi | 10 mkl | 1× |
| Oldindan teskari transkriptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNK polimeraza | 1-2 U | |
| Oldinga primer (10 mkM) | 0,8 mkl | 50-900nM |
| Teskari astar (10 mkM) | 0,8 mkl | 50-900nM |
| Zond (4 mkM) | 1 mkl | 200nM |
| Shablon (RNK yoki lizat) | X mL | |
| 20× ROX mos yozuvlar bo‘yog‘i | - | 1* |
| RNase-FreddH2O | (6,4-X) mkl | |
| Umumiy hajm | 20 mkl |
Eslatma: Forward Primer va Reverse Primer maqsadli genning o'ziga xos primerlaridir.QPCR tizimi amaliy eksperimental va PCR modellariga muvofiq sozlanishi mumkin.Ko'pgina primerlarning yakuniy konsentratsiyasi uchun 400nM ni tavsiya qilamiz.Iltimos, tayyorlangan konsentratsiyaga va tavsiya etilgan yakuniy konsentratsiyaga muvofiq maxsus primerlar va problar hajmini sozlang.
1*: ROX Reference Dye ning mos yakuniy kontsentratsiyasini turli miqdoriy PCR asboblariga ko'ra tanlang.Umumiy miqdoriy PCR asboblarining optimal ROX Reference Dye kontsentratsiyasi quyidagi jadvalda ko'rsatilgan:
| Kantitativ PCR asboblari | ROX Reference Dye ning yakuniy kontsentratsiyasi |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Birinchi qadam,va boshqalar. | 1 × (masalan, 20 mkL reaktsiya tizimiga 1 mkl 20 × ROX mos yozuvlar bo'yoq qo'shing) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P va Mx4000 va boshqalar. | 0,5 × (masalan, 20 mkl reaktsiya tizimiga 0,5 mkl 20 × ROX mos yozuvlar bo'yoq qo'shing) |
| Roche PCR asbobi, Bio-Rad PCR asbobi, Eppendorf miqdoriy PCR asbobi va boshqalar. | ROX Reference Bo'yoqsiz |
Saqlash va saqlash muddati
To'plam -20 ± 5 ℃ haroratda saqlanishi kerak.U darhol -20 ℃ termostatik muzlatgichda saqlanishi kerak.Yaroqlilik muddati, agar u tegishli sharoitda saqlansa, 2 yil.
