To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami
Tavsif
To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR to'plami alohida paketlangan RT-qPCR buferi va yuqori samarali fermentni ta'minlaydi.aralashmasi (Taq, M-MLV, RI), bu orqa to'plamlar va tizimlarni yaratish uchun qulay qiladi.sozlash, oddiy tekshirish doirasida.
Texnik xususiyatlari
500T, 50000T
To'plam komponentlari
To'plam tarkibi (20 mL reaktsiya tizimi) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T | 50 000 T | |
To'g'ridan-to'g'ri ferment aralashmasi | 500 mkl×1 | 50 ml×1 |
2 × To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR buferi | 1 ml×5 | 500 ml×1 |
Ko'rsatma | 1 | 1 |
Operatsion bosqichlari
Reaktivni tayyorlashdan oldin, to'plamdagi barcha reagentlarni xona haroratida eritib, muloyimlik bilan aralashtirish kerak.
A: Tayyorlang of shablon va reaktiv
1. Tayyorlangan RNK shablonini (RNK shablonini ajratib olish va tozalash uchun Foregene Total RNK Isolation Kit seriyali to'plamidan foydalanish tavsiya etiladi) yoki namunali kreking mahsulotini (Foregene Lysis tizimidan foydalanish tavsiya etiladi), maxsus primerlarni (10 mkM) va boshqa tegishli sarf materiallarini, asbobni tayyorlang.
2. 2× Direct RT-qPCR buferini, RNase-Free ddH2O va 20× ROX Reference Dye (agar bo‘lsa) qo‘ying's kerak) muz bilan qutiga soling, ularni tabiiy ravishda eritib, muloyimlik bilan aralashtiring.
B: Tayyorlang of RT-qPCR tizimi
Jadval 1 : Tayyorlang of RT-qPCR stizim
Komponent | Hajmi | Yakuniy konsentratsiya |
2 × To'g'ridan-to'g'ri RT-qPCR buferi | 10 mkl | 1× |
To'g'ridan-to'g'ri ferment aralashmasi | 1mL | |
Oldinga primer (10 mkM) | 0,8 mkl | 50-900nM |
Teskari astar (10 mkM) | 0,8 mkl | 50-900nM |
Zond (4 mkM) | 1mL | 200nM |
Shablon (RNK yoki lizat) | X mL | |
20 × ROX mos yozuvlar bo'yog'i | - | 1* |
RNase-FriddH2O | (6,4-X) mkl | |
Umumiy hajm | 20mL |
C: Oʻrnatish the RT-qPCR reaktsiya dastur
Jadval 2 : RT-qPCR reaksiyaon dastur sozlash (uchun misol: ikki-qadam usuli)
Qadam | Harorat | Vaqt | Velosipedlar | Tarkib | |
1 | 50℃ | 15 min | 1* | 1 | Teskari transkripsiya |
2 | 95℃ | 1 min | 1 | Oldindan denaturatsiya | |
3 | 95℃ | 10 sek | 40-45 | Denaturatsiya | |
60℃ | 30 soniya 2* | Anal / Kengaytma |
Saqlash va saqlash muddati
-To'plam -20 da saqlanishi kerak± 5℃.Amal qilish muddati 12 oy.
- Muzlatish-eritish davrlarini takrorlashdan saqlaning (<5 sikl).